★ 胥爱丽 江洁仪 罗文汇 李养学 李素梅 谭志灿 (广东省中医研究所 广州510095)

紫花地丁为堇菜科植物紫花地丁Viola yedoensis Makino的干燥全草，具有清热解毒，凉血消肿之功效，用于治疗疔疮肿毒，痈疽发背，丹毒，毒蛇咬伤等症［1］。紫花地丁含有多种化学成分，如:黄酮及其苷类、香豆素及其苷类、植物甾醇、生物碱、挥发油、糖类等。其中黄酮类化合物及香豆素类化合物是紫花地丁中重要的活性成分［2］。紫花地丁配方颗粒是由紫花地丁饮片经提取后浓缩干燥而成，其中秦皮乙素在紫花地丁配方颗粒有效部位化学成分中的含量较高，且具有明显的抗炎、抑菌、镇痛、抗氧化、抗肿瘤和免疫调节等作用［3］。中国药典2010年版一部并未收载紫花地丁的含量测定方法，且目前文献的报道主要针对紫花地丁药材及复方中药制剂中秦皮乙素的含量测定［4－11］，而对中药新型饮片紫花地丁配方颗粒中秦皮乙素的含量测定方法却未见报道。本研究建立了紫花地丁配方颗粒的含量测定方法，结果表明该方法灵敏度高，重现性好，为紫花地丁配方颗粒的质量控制提供参考。

1 仪器与试药

1．1 仪器 Waters e2695高效液相色谱仪，PDA检测器，四元梯度泵，Empower Pro色谱工作站，METTLER TOLEDO型电子分析天平，KQ5200DE型超声波清洗器。

1．2 试药 甲醇为色谱纯试剂(一级)，水为双蒸水，其它试剂均为分析纯;秦皮乙素对照品(批号:741－9002)购于中国药品生物制品检定所;紫花地丁配方颗粒(批号:1104308)购于广东一方制药有限公司。

2 方法与结果

2．1 色谱条件 色谱柱:Waters XBridgeTM C18(4．6mm ×250mm，5μm)柱;流动相:甲醇(A)－0．4%磷酸溶液(B)，梯度洗脱;洗脱梯度:0－15分钟，20% －25%A，15－30 分钟，25% －40%A，30－35分钟，40% －60%A，35－60分钟，60% －95%A;检测波长:236nm;柱温:25℃;流速:0．8mL/分;进样量10μL。

2．2 对照品溶液的制备 精密称取秦皮乙素对照品4．47 mg，置50 mL容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。

2．3 供试品溶液的制备 取本品内容物，混匀，研细，取约0．2g，精密称定，置50mL具塞锥瓶中，精密加入甲醇50mL，称重，超声处理(功率200W，频率40kHz)30分钟，取出，放冷，加甲醇补充减失重量，摇匀，过0．45μm滤膜，取续滤液，作为供试品溶液。

2．4 线性范围的考察 分别精密吸取秦皮乙素对照品溶液(每 1mL含秦皮乙素 11．06μg)2、4、6、8、10、12 μL，注入液相色谱仪，按上述色谱条件测定峰面积，并以峰面积积分值为纵坐标(Y)，秦皮乙素对照品进样量为横坐标(X)，进行线性回归，得标准曲线:Y=3000X+3540，r=0．999 971。表明秦皮乙素在178．8－1072．8ng范围内呈线性关系。

2．5 精密度试验 精密吸取对照品溶液(0．0894mg·mL－1)10μL重复进样6次，测得峰面积积分值的RSD为1．59%，表明仪器精密度良好。

2．6 稳定性试验 取样品供试液(批号1104308)分别于0、2、4、8、12、24 小时进样 10μL，测得样品中秦皮乙素峰面积值的RSD为1．84%，表明样品供试液在24小时内稳定。

2．7 重复性试验 按拟定的含量测定方法，取同一批样品(批号:1104308)6份，分别制备供试液，测得峰面积并计算含量，结果供试品中秦皮乙素的RSD为 1．55%。

2．8 回收率试验 取已知含量的样品(批号1104308)，分别精密加入一定量的秦皮乙素对照品，按供试品制备与测定方法，平行做9组，计算回收率。结果见表1。

表1 秦皮乙素回收率测定结果

2．9 样品的测定 分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10 μL，按上述色谱条件进行测定，结果见表2。

表2 样品中苦参碱含量测定结果(n=2)

3 讨论

本实验在参考文献的基础上对秦皮配方颗粒中秦皮乙素的含量测定方法进行摸索。实验表明，秦皮乙素在秦皮配方颗粒中含量较高，且具有明显的药理作用，故选择其作为指标成分对秦皮配方颗粒的质量进行控制。

图1 紫花地丁配方颗粒HPLC色谱图

对秦皮乙素对照品溶液进行全波长扫描(190－400nm)，在236nm处有最大吸收，故选择236nm作为检测波长。曾采用甲醇－0．4%磷酸溶液(20∶80)等度洗脱作为流动相，但杂峰较多，杂峰在等度洗脱的条件下出峰时间较晚，导致样品分析时间较长，故采用甲醇－0．4%磷酸溶液梯度洗脱的方法进行测定。

本实验采用HPLC法对秦皮配方颗粒中所含秦皮乙素的含量进行测定，操作简单，结果准确，重复性好，可作为秦皮配方颗粒的质量控制方法。

［1］国家药典委员会．中华人民共和国药典［S］．一部，北京:化学工业出版社，2010:317．

［2］毛晓霞，苗光新，于海龙，等．紫花地丁的研究进展［J］．承德医学院学报，2010，27(3):302．

［3］陈胡兰，汤沛然，张梅，等．不同产地紫花地丁中秦皮乙素的含量比较［J］．成都中医药大学学报，2010，33(1):68．

［4］王冬萍，周建华，将慧．HPLC法测定二丁片中秦皮乙素的含量［J］．中国保健营养，2012，06:1 566．

［5］赵庆华，杨雪萍，王宝全，等．消炎片的质量标准研究［J］．中国药事，2011，25(1):65．

［6］常亮，陈珍珍．HPLC法测定紫花地丁软膏中秦皮乙素的含量［J］．江西中医药，2011，4(42):68．

［7］林夏楠，林巧之．紫花地丁中秦皮乙素含量测定研究［J］．海峡药学，2008，20(9):60．

［8］林莉，麦曦，仲英，等．紫花地丁高效液相色谱法指纹图谱的建立和评价［J］．理化检验 －化学分册，2011，47(12):1 461．

［9］袁志军．紫花地丁软膏的制备与含量测定［J］．亚太传统医药，2011，7(6):14．

［10］郭晓秋．HPLC法测定紫花地丁中秦皮乙素的含量［J］．江西中医药学院学报，2006，18(1):34．