韩丽萍，王相东，魏敏惠，刘 实，史亚军，王小宁，方改英，张小琴

(1.陕西中医学院，陕西 咸阳 712046;2.宝鸡市中医医院，陕西 宝鸡 721000)

前期实验［1，2］表明，补肾活血中药仙鹿壮骨方能提高骨质疏松模型大鼠骨密度和I型胶原基因表达，改善骨组织形态，对防治骨质疏松症具有良好效果。为进一步探讨该方不同配伍之间对骨质疏松症大鼠的治疗作用及其配伍规律，我们对仙鹿壮骨方进行拆方研究，分别检测该方君臣佐各组药物组合对骨质疏松模型大鼠的骨密度、转化生长因子的影响，并将结果报道如下。

1 材料

1.1 实验动物来源及分组

选用4月龄SD雌性大鼠153只(西安交通大学医学院提供，动物级别:二级，合格证号医东字第08005 号)，体质量200 ～250g，随机分为13 组:1、君臣大剂量组;2、君臣小剂量组;3、君佐大剂量;4、君佐小剂量组;5、臣佐大剂量组;6、臣佐小剂量组;7、佐药大剂量组;8佐药小剂量组;9、全方大剂量组;10、全方小剂量组;11、西药组;12、模型组;13、空白组。

1.2 药物来源及分组

仙鹿壮骨方由淫羊藿20g、菟丝子10g、鹿角胶5g、杜仲 10g、骨碎补 10g、三七 3g、山楂 10g 组成。该方君药为淫羊藿、菟丝子;臣药为:鹿角胶、骨碎补、杜仲;佐药为:三七、山楂。随实验动物进行相应分组。各组药物由陕西中医学院制剂室按照实验要求及制药标准制备。

造模所用的地塞米松磷酸钠注射液，由湖北天药药业股份有限公司生产，国药准字:H42020019，产品批号:20051109。西药:新盖中盖高钙片，哈药集团制药六厂，批号:20060116-2。麻醉剂:盐酸氯胺酮注射液，福建古田药业有限公司(批号050504，规格:2ml:0.1g)。

1.3 主要试剂与仪器

血清骨钙素(BGP)放免药盒由解放军总医院科技开发中心提供;放射免疫测定用美国Roche公司Elecsys2010检测仪器;HPIAS-1000型高清晰度彩色图像分析系统，CCD130万像素荧光显微镜，XSY-I型号，重庆光学仪器厂提供;骨密度检测用 QDR-2000型双光能X线骨密度仪，美国HOLOGIG公司产品。

2 方法

2.1 给药方法

除空白组外，其余组均以地塞米松0.1mg/100g，每周2次肌肉注射造成骨质疏松模型。中药实验组大鼠，分别按照分组，用中药汤剂灌胃。具体用量见表1、表2;西药组以10IU/100g新盖中盖药液灌胃，每日1次，加维生素D 3肌肉注射6万U/kg，每2周1次。模型组和空白组以1ml/100g蒸馏水灌胃，每日1次。用药观察12周后全部处死取材。

2.2 检测方法和指标

2.2.1 骨密度检测 取动物一侧股骨连同膝关节，送第四军医大学骨科研究室检测骨密度;

2.2.2 转化生长因子检测(TGF-β1) 在膝关节处取材、固定，PBS漂洗、脱钙、漂洗、包埋，切取5um厚组织裱于APES包被过的载玻片上。37℃烤干，－20℃存放，然后进行免疫组织化学染色观察TGF-β 表达。

3 结果

3.1 骨密度值

表1显示，模型组BMD降低，与空白组比较差异有统计学意义(P＜0.05);用中西药治疗后，各组骨密度均有提高(P＜0.05);全方大剂量、君臣大剂量与西药组比较差异有统计学意义(P＜0.05)，全方组与君佐及佐药组比较差异有统计学意义(P＜0.05);君臣组与佐药组比较差异有统计学意义(P＜0.05);中全方大小剂量组间比较差异有统计学意义(P＜0.05)。

表1 各组骨密度值BMD值(g/cm2)

3.2 TGF-β1在大鼠股骨组织中表达情况

表 2 TGF-β1表达情况

表2显示，模型组 TGF-β1值明显降低，说明造模成功;治疗组中大部分和模型组比较(P＜0.05)，说明治疗有效果;全方大剂量组与臣佐大剂量组、佐药大剂量组比较(P＜0.05)，说明全方大剂量组效果明显优于以上2组;全方大剂量组和西药组比较(P＞0.05)，说明全方大剂量组和西药效果相当。

4 讨论

TGF-β1是调控骨代谢最为重要的细胞因子，也是骨组织中含量最丰富的生长因子，主要由成骨细胞(OB)合成、分泌，被认为是成骨细胞与破骨细胞(OC)之间耦联的重要生长因子［3］。它具有刺激间充质细胞的增殖与分化、促进成骨细胞、成软骨细胞的增殖及细胞外基质的合成作用，并抑制破骨细胞的生成及生物活性［4］。有研究发现，治疗骨质疏松症的有效药物可以促进骨髓基质中的成骨细胞表达TGF-β1，并抑制 TNF-α 的表达，间接抑制骨吸收［5］。因此，TGF-β1是骨重建的关键性因子，在骨吸收和骨形成中起重要作用。

仙鹿壮骨方中淫羊藿、菟丝子补肾阳、强筋壮骨为君药，辅以鹿角胶、骨碎补、杜仲温补肾阳、滋养精血，以加强补肾养骨之力，三者共为臣药;三七活血散瘀止痛、山楂活血且健胃导滞，促进药物及营养物质的有效吸收，均为佐药;全方以补肾壮骨为主，活血通脉为辅，补而不滞，疏补相合，共奏促进骨形成、抑制骨吸收之功效。根据现代药理学研究，淫羊霍苷能显著提高骨质疏松模型大鼠血清E2、腰椎骨密度和骨小梁的骨密度，改善骨质疏松症的病理形态学改变［6］。

本实验结果显示，在改善骨质疏松症大鼠骨密度效果方面，仙鹿壮骨方全方组 ＞君+佐＞君+臣＞臣+佐＞佐药组，且全方组存在量效关系，疗效随剂量增大而增强。提示单纯补肾药与单纯活血药以及补肾加活血药虽均能改善骨质疏松症大鼠骨密度，但程度上存在明显差异，以补肾加活血药配伍效果最好。且后者在提高大鼠骨密度的同时，其改善骨组织形态结构效果显著。从本实验结果可以看出，TGF-β1在全方大剂量组中表达最多，说明全方要比各拆方部分效果显著;各拆方组与全方大剂量组比较，只有臣佐大剂量组和佐药大剂量组差异有统计学意义(P＜0.05)，说明组方中君药、臣药是主要组成部分，是该方发挥药效的关键。由此可见，补肾、活血以及补肾加活血药治疗均能提升TGF-β1表达，但后者疗效优于单纯补肾或单纯活血药。这些都从实验角度印证了骨质疏松症肾虚与血瘀同时存在，治疗时须二者兼顾，为总结治疗该病的中药配伍规律提供了实验依据。

［1］ 韩丽萍，魏敏惠，等.仙鹿壮骨方对骨质疏松大鼠I型胶原基因表达的影响［J］.陕西中医，2006，26(9):1151-1152.

［2］ 韩丽萍，魏敏惠，等.仙鹿壮骨方对骨质疏松大鼠骨密度及其形态结构的影响［J］.陕西中医学院学报，2006，29(6):43-44.

［3］ 刁迎斌，孙玉倩，等.老年男性骨质疏松症患者血清转化生长因子 B1测定及其临床意义［J］.实用老年医学，2007，21(5):317-319.

［4］ 聂宇.转化生长因子β与骨质疏松症关系的研究进展［J］.安徽医药，2010，14(12):1489-1490.

［5］ 甘国兴，莫新民.壮骨止痛方水提B部位对去势雌鼠骨质疏松的疗效及机理研究［J］.中国中医基础医学杂志，2011，17(2):158-160.

［6］ 刘仕杰，莫新民.淫羊霍苷对去卵巢骨质疏松症雌鼠的疗效及机理初步研究［J］.中国中医基础医学杂志，2012，18(3):271-273.