孙勤国 吕 琨

1武汉市第三医院中医科，武汉 430060

2湖北中医药大学，武汉 430065

动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）是一组称为动脉硬化的血管病中最常见、最重要的一种，其特点是动脉管壁增厚变硬、失去弹性和管腔缩小[1]。在AS病理机制的认识上，1999年Ross[2]在内皮损伤反应学说基础上提出，AS是一种炎症性疾病。炎症反应贯穿于AS起始、病变进展、斑块破裂及血栓形成的全过程[3]。因此，针对炎症机制有望寻找到抗动脉硬化的新靶点与治疗手段[4]。本实验通过高脂饲料喂养联合腹腔注射维生素D3建立AS大鼠模型，观察小陷胸汤对AS大鼠主动脉病理形态学、炎性因子及主动脉内膜厚度的影响，探讨其抗AS的可能机制。

1 材料与方法

1.1 动物

健康SPF级雄性Wistar大鼠60只，体重（210±20）g，由华中科技大学同济医学院实验动物中心提供，合格证号：0018633，饲养于安静、洁净、避强光的环境中，室温（20±5）℃，相对湿度40%～60%。

1.2 药物与试剂

小陷胸汤出自《伤寒论》，由黄连6g，半夏12g，栝楼实30g组成。以上药材均由本院中药房提供，中药炮制室用传统方法浸泡，煎煮，过滤，浓缩，制成煎剂，其中小、中、大剂量每毫升含生药分别为0.21、0.42、0.84g，真空包装，低温冷藏备用。阿托伐他汀（立普妥），10mg／片，购自美国辉瑞制药有限公司（批号：J20030047）。维生素D3注射液购自上海通用药业股份有限公司（批号：H31021404）。大鼠白介素－6（IL－6）、氧化型低密度脂蛋白（ox－LDL）、血管细胞黏附分子－1（VCAM－1）的ELISA试剂盒购自上海瑞齐生物科技公司。急性期反应蛋白（CRP）试剂盒购自上海科华生物工程股份有限公司。

1.3 动物分组及造模

适应性喂养1周后，采用随机数字表法将大鼠随机分成6组：正常组、模型组、阿托伐他汀组及小陷胸汤低、中、高剂量组，每组10只。正常组进食基础饲料（53.0%碳水化合物、9.0%脂肪、21.0%蛋白质）。其余各组在喂食高脂饲料（3.0%胆固醇、0.2%丙基硫氧嘧啶、0.5%胆酸钠、10.0%猪油、5.0%白糖、81.3%基础饲料）的同时，在进食高脂饲料第1天，一次性腹腔注射维生素D360万IU／kg[3]，正常组注射同等体积的生理盐水。

造模第3周开始，根据人与大鼠体表面积换算法，小陷胸汤低、中、高剂量组大鼠分别灌胃小陷胸汤小剂量、中剂量、大剂量煎剂（按2ml／200g计算），1次／d。阿托伐他汀组给予阿托伐他汀5mg／kg水溶液灌胃，1次／d。正常组及模型组则分别灌服等容积的生理盐水。各组均连续灌胃12周。

1.4 血清学检测指标

末次给药后，隔夜禁食12h，腹主动脉采血，3 000 r／min离心10min，分离血清。采用ELISA法检测血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1浓度，采用免疫比浊法测定血清CRP水平。

1.5 动脉内膜厚度的测定

取3.0cm左右长的主动脉血管，剥离外膜附着组织，制作冰冻切片，然后进行油红O染色，步骤如下：将冷冻切片常温干燥25min后，60%异丙醇浸洗10min，油红O染液染色10min，用60%异丙醇漂洗除去多余染料，Mayer苏木精复染1min，自来水蓝化1～3min，蒸馏水洗，滤纸吸干水分，甘油明胶封片。光镜下观察其病理形态，组织细胞中脂滴呈橘红色，核呈蓝色。应用计算机图像分析系统（motic images advanced 3.0图像分析软件）测主动脉内膜厚度，每片随机取3个视野，取其平均值。

1.6 统计学处理

采用SPSS 16.0统计软件进行分析，计量资料以±s表示，组间比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 各组大鼠血清炎性因子水平

与正常组比较，模型组大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明显升高（P＜0.01）；与模型组比较，小陷胸汤各剂量组及阿托伐他汀组大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP 水平明显降低（P＜0.01）。见表1。

表1 各组大鼠血清炎性因子水平的比较（n＝10，±s）

表1 各组大鼠血清炎性因子水平的比较（n＝10，±s）

与正常组比较＊＊P＜0.01；与模型组比较△△P＜0.01

组别 IL－6（ng／L） ox－LDL（mmol／L） VCAM－1（pg／ml） CRP（mg／L）96.25±13.65 4.38±1.47 0.78±1.91 0.50±0.67模型组 406.46±23.15＊＊ 17.84±3.38＊＊ 5.67±3.03＊＊ 4.52±0.18＊＊小陷胸汤低剂量组 253.75±16.45△△ 9.85±2.41△△ 2.13±2.05△△ 1.84±0.41△△小陷胸汤中剂量组 158.75±15.97△△ 9.65±1.45△△ 1.65±1.76△△ 0.77±0.73△△小陷胸汤高剂量组 161.46±18.55△△ 10.12±2.07△△ 1.84±2.26△△ 1.76±0.77△△阿托伐他汀组 325.21±20.36△△ 15.74±2.31△△ 3.71±2.54△△ 2.45±0.21正常组△△

2.2 各组大鼠主动脉内膜厚度

与正常组比较，模型组内膜厚度显著增加（P＜0.01）；与模型组比较，各治疗组内膜厚度明显降低（P＜0.05，P＜0.01）。见表2。

2.3 各组大鼠主动脉病理形态学

正常组大鼠主动脉内膜表面光滑，内膜无脂质沉积，未见异常改变；模型组大鼠主动脉内膜明显增厚，可见大量红色脂质沉积，油红O染色阳性区呈片状；各治疗组大鼠血管腔内亦可见红色脂质沉积，但较对照组呈不同程度减轻。见图1。

表2 各组大鼠主动脉内膜厚度的比较（n＝10，mm，±s）

表2 各组大鼠主动脉内膜厚度的比较（n＝10，mm，±s）

与正常组比较＊＊P＜0.01；与模型组比较△P＜0.05，△△P＜0.01

1.77±0.43模型组 18.18±2.23＊＊小陷胸汤低剂量组 14.79±1.93△小陷胸汤中剂量组 6.21±1.35△△小陷胸汤高剂量组 8.98±0.65△△阿托伐他汀组 3.78±0.66组别 主动脉内膜厚度正常组△△

图1 各组大鼠主动脉病理形态学（油红O染色，×400）

3 讨论

AS主要累及大中动脉，其基本病变是在动脉内膜形成粥样斑块，使动脉壁变硬，管腔狭窄，从而引起一系列继发性病变[1]，因其常并发心、脑血管意外事件而占疾病病死率的首位。越来越多的研究[5－10]表明，AS是一种慢性、亚临床的炎症性疾病，疾病的发生进展都和炎症相关，与炎症反应相关的IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP在AS的形成和发展中起到重要作用。

小陷胸汤由黄连、半夏、栝蒌实三味药组成，方出《伤寒论》，具有清热化痰，消痞散结之功效，临床上该方加减后广泛用于心血管类疾病的治疗。左建国[11]用加味小陷胸汤联合辛伐他汀治疗高脂血症42例，结果总有效率为95.2%。刘远婷等[12]用小陷胸汤联合丹参饮治疗痰瘀闭阻型冠心病心绞痛患者30例，取得了较好疗效。李景君等[13]用加味小陷胸汤治疗不稳定型心绞痛，选择符合诊断标准的不稳定型心绞痛患者30例，结果总有效率90.0%。

本研究采用高脂饲料配合维生素D3腹腔注射，复制AS大鼠模型，可观察到脂质斑块形成，主动脉内膜明显增厚。该方法价格低廉，且能快速建立AS模型，是目前研究AS应用最为广泛的模型建立方法之一[14]。本研究发现，模型组血清 IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明显高于正常组，提示上述炎性介质与AS的形成密切相关，与目前众多研究结果是一致的[15－17]。经小陷胸汤灌胃12周后，大鼠血清IL－6、ox－LDL、VCAM－1、CRP水平明显降低，主动脉内膜厚度减小，其中小陷胸汤中剂量组效果更明显。

综上所述，小陷胸汤可降低AS大鼠血清炎性因子水平，抑制内膜厚度的增加，这可能是小陷胸汤抗AS的机制之一。

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