武 强

(复旦大学附属上海市第五人民医院检验科，上海 200240)

超氧化物歧化酶(SOD)是广泛存在于生物体内能清除超氧阴离子自由基的一类金属酶，在机体氧化与抗氧化平衡中起到至关重要的作用，与很多疾病的发生、发展密不可分。SOD的测定方法有直接法和间接法。目前大多数实验室采用间接法进行活性检测。邻苯三酚法是间接法中的一种，是根据邻苯三酚自氧化可产生强荧光的醌，SOD通过清除该反应过程中产生的超氧阴离子自由基()使醌减少而建立起来的动力学方法，适用于各种自动化分析仪。目前国内对于该方法测定SOD的参考范围少有报道。本研究旨在建立本地区血清邻苯三酚法SOD参考范围。

材料和方法

一、材料

1.仪器 ROCHE Modular 4P全自动生化分析仪。

2.试剂 血清SOD试剂盒(批号110104-01)及配套校准品(批号:20110114)、质控血清(批号:高值20110104、低值20110104)由福建福缘生物科技有限公司提供。

二、方法

1.对象 2011年4月至7月在复旦大学附属上海市第五人民医院健康体检者(包括招工体检、学生体检、征兵体检、职工体检、退休人员体检等，不包括正常妊娠妇女)，从中筛选出体检结论正常者1640人(排除心脑血管疾病、高血压、糖尿病、肝病、肾病、自身免疫及其他影响血清SOD水平的疾患)，其中男878名、女762名，年龄17～87岁。根据年龄分为5组:≤30岁组(男157名、女204名);31～岁组(男152名、女150名);41～岁组(男179名、女177名);51～岁组(男239名、女131名);＞60岁组(男151名、女100名)。

2.样本收集、检测 清晨空腹坐位采取静脉血4 mL，1 h内分离血清，4 h内完成测定。

3.测定方法 邻苯三酚法。在碱性工作液中，邻苯三酚会产生自氧化显色反应，在其自氧化过程中不断释放出。当SOD活性降低时，释放发生歧化反应被抑制浓度升高，从而抑制邻苯三酚的自氧化，其显色反应强度减弱，即样本中邻苯三酚自氧化的显色反应强度与SOD的活性呈正相关关系。按试剂盒说明书设置仪器的测定参数。

4.SOD单位定义 在25℃恒温条件下，每毫升反应液中每分钟抑制邻苯三酚自氧化率达50%的酶量定义为1个酶活力单位。

5.试剂盒性能 (1)精密度评价:参考美国临床实验室标准化研究协会(CLSI)EP5-A2文件，选择低值和高值2个水平的质控品2份，一份平行测定20次，计算批内变异系数(CV);一份连续检测20 d，计算批间CV;(2)正确度评价:选取2个水平质控品(高值 200 U/mL;低值150 U/mL)进行测定，每个水平重复测定5次取均值，计算测定结果与靶值的偏倚;(3)线性范围评价:参考 CLSI EP6-A2文件，选取高(H)、低(L)2个水平样本，将H和L样本按4L、3L+1H、2L+2H、1L+3H、4H比例得到系列评价样本，每个样本重复测定4次，将理论值与实测值用直线回归进行统计。

三、统计学方法

运用SPSS11.5统计软件对数据进行分析，计量资料采用来表示。P＜0.05表示差异有统计学意义，对所有数据进行正态性检验，SOD与年龄的相关性分析采用pearson直线相关分析，男、女组不同年龄段之间采用方差分析，并进一步采用SNK检验进行多组间均数的比较，同组男、女均数比较用t检验法，总体参考范围由±2s计算出。

结 果

一、试剂盒性能评价结果

1.精密度 高值和低值的批内CV和批间CV分别为 0.94%、1.45%和 1.13%、1.69%。

2.正确度 高、低值2个水平质控品测定结果与靶值偏倚分别为1.80%、2.27%。

3.线性范围 实测值与理论值回归方程为Y=0.9967X+1.9492，r=0.9999，实测线性范围30～570 U/mL。试剂盒测定范围15～400 U/mL。

二、血清SOD浓度与受检者性别的关系

所有受检者血清SOD浓度的分布经正态性检验呈正态分布，男、女性组血清SOD浓度分别为(170.0 ±23.4)U/mL 和(164.0 ±20.4)U/mL，二者比较差异有统计学意义(P＜0.01)，结果见表1。

表1 1640名健康成人血清SOD浓度分析(，U/mL)

表1 1640名健康成人血清SOD浓度分析(，U/mL)

注:与同年龄组女性比较，*P＜0.01;与≤30岁组比较，#P ＜0.01;与31～岁组比较，ΔP ＜0.01;与41～ 岁组比较，▲P ＜0.01;与51～岁组比较，＆P ＜0.01

年龄(岁)男女例数SOD 例数SOD 204 174.8 ±15.931 ～ 152 181.8 ±18.0* 150 171.9 ±14.141 ～ 179 170.8 ±22.3*#Δ 177 160.8 ±14.2#Δ 51 ～ 239 168.7 ±15.6*#Δ 131 159.8 ±20.3#Δ＞60 151 144.5 ±23.2*#Δ▲＆ 100 141.5 ±23.0#Δ▲＆合计 878 170.0 ±23.4*≤30 157 184.2 ±17.4*762 164.0 ±20.4

三、血清SOD浓度与年龄之间的关系

血清SOD浓度与年龄呈负相关(r=－0.541，P ＜0.01)，见图 1。在男、女 2 组 SOD浓度均随年龄的增长而降低。与≤30岁组比较，除31～岁组外，其余3组差异均有统计学意义(P均＜0.01)。＞60岁组与41～岁及51～岁组比较差异有统计学意义(P＜0.01)，且＞60岁组浓度变化最大，见表1。

图1 健康成人血清SOD浓度与年龄的相关性

四、健康成人SOD参考范围

根据以上分析将受检者分为6组。男性:≤40岁组为147.6 ～218.4 U/mL，41 ～60 岁组为131.4～207.8 U/mL，＞60 岁组为 98.1 ～190.9 U/mL;女性:≤40岁组为142.0 ～205.2 U/mL，41 ～60 岁组为126.4～194.4 U/mL，＞60 岁组为 95.5 ～187.5 U/mL。

讨 论

SOD是广泛存在于生物体内能清除超氧阴离子自由基的一类金属酶，按所含金属种类不同，人类SOD可分为3类:铜锌SOD、锰SOD和胞外SOD[1]。本研究所测定的血清 SOD主要是分泌到胞外的SOD浓度[2]。SOD具有特殊的生理活性，是生物体内清除自由基的首要物质。SOD在生物体内水平的高低可以间接反映体内氧自由基水平。现已证实，人体利用的氧气中有1% ～5%被转化为氧自由基[3]，由氧自由基引发的疾病多达60多种。SOD是机体重要的氧自由基清除剂[4]，可对抗与阻断因氧自由基对细胞造成的损害，并及时修复受损细胞。因此，在生物抗氧化机制中SOD的地位越来越重要，对辐射有防护作用，能减少糖尿病慢性并发症及肺部疾病，其抗炎活性可减少缺血再灌注损伤，预防心血管疾病，还具有抗肿瘤、抗衰老等作用。

血清SOD浓度在不同性别之间有明显差异，这有可能与个体的体型有关，与国外报道有所不同，可能与种族不同有关[5]。血清SOD与年龄呈负相关。在不同的年龄段其浓度有所变化，随着年龄的增加(r= －0.541，P ＜0.01)，SOD 呈逐渐下降趋势。因此，使机体细胞更易受到氧化剂的攻击，而引起老化和疾病[6]，特别是一些与年龄相关的疾病。

本研究对象总体血清SOD浓度呈正态分布，参考范围男性:≤40岁为147.6～218.4 U/mL、41～60岁为 131.4～207.8 U/mL、＞60岁为98.1 ～190.9 U/mL;女性:≤40 岁为 142.0 ～205.2 U/mL、41 ～60 岁为 126.4 ～194.4 U/mL、＞60岁为95.5 ～187.5 U/mL。因此，根据实验室所采用的检测系统和所采用的方法建立本实验室参考范围是非常必要的。邻苯三酚法具有性能稳定、精密度高、试剂简单等优点，在临床中应用越来越广泛。SOD测定虽然是一种非特异的辅助诊断指标，但对机体自由基代谢紊乱、自由基清除干预对策以及对于同一病患者病程转归的判断，实时动态监测具有重要参考价值。

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