高 波，李海平，余宗涛，吕 军，张吉才

(湖北医药学院附属太和医院检验科，湖北 十堰 442000)

我们既往的研究发现原发性肝癌组织中p16基因发生甲基化的频率非常高，并且通过分组发现乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染相关肝癌的p16基因甲基化的频率要高于非HBV相关肝癌，提示HBV的持续感染对p16基因的异常甲基化有一定作用，但其作用机制尚不明确[1-3]。基因的异常甲基化可能与多种因素有关，包括甲基化转移酶(DNA methyltransferase，DNMT)水平、致癌物接触、基因修复缺陷等，其中DNMT是调节甲基化的主要因素。为了解HBV感染与DNMT表达之间的关系，本研究采用荧光定量聚合酶链反应(polymerase chain reaction，PCR)检测44例原发性肝癌组织和HBV相关肝癌细胞系Hep3B、非HBV相关肝癌细胞系HepG2中4 种 DNMT mRNA(DNMT1、DNMT2、DNMT3A、DNMT3B)的表达情况，初步探讨DNMT mRNA表达改变与HBV感染及肝癌等的关系。

材料和方法

一、临床资料

收集太和医院2010年12月1日至2012年2月1日的肝癌患者术后新鲜癌组织标本44例，患者男35例，女9例。所有组织标本均经病理学确诊，临床资料完整。组织标本收集后液氮中保存备用。根据患者血清中HBV标志物的存在与否，将癌组织分为2组。HBV相关性肝癌组:共32例，患者血液标本中至少检测出一种HBV感染的标志物，HBsAg、HBeAg、抗 HBe、抗 HBc 或 HBV DNA;非HBV相关性肝癌组:血液标本中未检测出任何一种HBV感染标志物，共12例。

二、细胞及主要仪器试剂

肝癌细胞系Hep3B和HepG2购于中国科学院典型培养物保藏委员会细胞库，来自于美国标准生物品收藏中心;细胞培养基DMEM、小牛血清均购于GIBCO公司;Trizol Reagent(Invitrogen公司);逆转录试剂盒(Promege公司);PCR试剂(上海生工公司……