戈 曼，吴星亮，尹 鑫，魏 萍，王晓钧*

（1.东北农业大学动物医学学院，黑龙江哈尔滨 150030；2.中国农业科学院哈尔滨兽医研究所兽医生物技术国家重点实验室/大动物病研究室，黑龙江哈尔滨 150001）

SAMHD1为鼠γ干扰素诱导基因Mg11的类似物，具有脱氧核苷三磷酸水解酶的功能，最近被鉴定为人免疫缺陷病毒（HIV-1）的限制性因子[1]。SAMHD1在树突状细胞和其他髓系细胞中呈高表达状态，并通过干扰病毒DNA的高效合成抑制前期的病毒复制，具有先天免疫功能。SAMHD1同时与一种以慢性脑脊髓炎流质淋巴细胞增多症的病因有关[2]，能够增高IFN-α的水平[3]。huSAMHD1基因全长约1 878 bp，其编码的huSAMHD1可以降解巨噬细胞内的大部分dNTP，在低水平的dNTP环境中HIV-1的反转录和cDNA的形成过程被有效抑制，而且HIV-1不能够感染髓系细胞[4-5]。而HIV-2和相关的免疫缺陷病毒（SIVsm/mac）则能够通过其编码的Vpx蛋白降解SAMHD1，从而越过骨髓细胞内的保护机制感染易感动物[6]。本研究通过原核表达huSAMHD1可溶性重组蛋白huSAMHD1，制备抗huSAMHD1的单克隆抗体（MAb），为深入研究SAMHD1的功能奠定了基础。

1 材料和方法

1.1 重组质粒、细胞及实验动物 原核及真核表达SAMHD1的重组质粒 pET-huSAMHD1、pcDNA-huSAMHD1（人）和 pcDNA-eqSAMHD1（马）及 pcDNA-macSAMHD1（猴）由本实验室构建；人单核细胞（THP-1）和人白血病细胞（U937）购自中国医学科学院基础医学研究所；SP2/0、293T、兔肾细胞、马及驴皮肤细胞由本实验室保存；BALB/c小鼠购自中国农业科学院哈尔滨兽医研究所实验动物中心。

1.2 主要试剂 HAT选择性培养基、HT选择性培养基、弗氏完全佐剂（FCA）、弗氏不完全佐剂（FICA）、IRD标记的羊抗鼠IgG（IRD-IgG）、羊抗鼠荧光二抗（FITC-IgG）及PEG-4000均购自Sigma公司；HiTrapProteinG HP购自GE公司；……