韩 阳，郝志超，王 琪，王文飞，赵景壮，郭 茉，吴云舟，叶贤龙，任桂萍，李德山

（东北农业大学生命科学学院生物制药教研室，黑龙江哈尔滨 150030）

犬细胞因子特别是干扰素（IFN）的抗病毒和免疫调节活性等作用在犬病治疗中引起广泛关注。DevosK等克隆了犬 IFN-γ（CaIFN-γ）基因[1]，杨琪等克隆了CaIFN-γcDNA，并用pRC/CMV2表达载体在鼠骨髓瘤细胞中进行表达[2]，但真核表达产量很低，陈忠广等探索了以包涵体形式表达的CaIFN-γ蛋白的稀释复性的条件[3]，但包涵体需经过重新折叠复性才能够获得其原有的生物活性，这使犬CaIFN-γ不能大量地应用于临床试验，所以获得高产量并且具有活性的CaIFN-γ蛋白是目前急需解决的关键问题。本实验利用SUMO（Small ubiquitin-like modifier-1）表达系统高效表达了可溶性的CaIFN-γ蛋白，SUMO可以作为分子伴侣来增加外源蛋白的稳定性和可溶性，其作用机理可能是SUMO蛋白作为一个高度疏水的核心，为目的蛋白的折叠提供成核位点，促进蛋白间的相互作用并使其正确折叠，最终增强了融合蛋白的可溶性[4]。本研究通过引入伴侣分子SUMO，实现CaIFN-γ蛋白的可溶性表达，并获得具有高生物学活性的IFN-γ蛋白，从而解决IFN-γ包涵体蛋白复性效率低，并且生物学活性差的问题。

1 材料和方法

1.1 载体、细胞株及菌株 pMD18-T载体购自TaKaRa公司；pSUMO expression质粒由本实验室保存；犬肾（Madin-Darby canine kidney，MDCK）细胞由东北农业大学动物传染病教研室提供；E.coliDH5α、E.coliRosetta（DE3）pLysS由本实验室保存。

1.2 主要试剂 TRIzol试剂购自Invitrogen公司；M-MuLV反转录酶购自Promega公司；蛋白分子质量标准购自Fermentas公司；T4 DNA连接酶、限制性内切酶购自NEB公司；SUMO ProteaseⅠ由本实验室表达纯化；……