ELISA检测唾液中乙型肝炎表面抗原方法的优化与评价
2013-08-24张进
重庆医学 2013年22期
张 进
(上海化学工业区医疗中心 200000)
中国是乙型病毒肝炎(HBsAg)的高发国家,根据流行病学调查,人群发生率较高。表面抗原携带率约为15%[1]。乙型肝炎的实验诊断对于其治疗及预防有重要参考意义。目前,中国大多数临床实验室都采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法来检测HBsAg,而检测样品大多数均为血清。抽取静脉血检验,受检者痛苦,且操作步骤繁琐,费时费力,存在一定风险,并不利于乙型肝炎疾病长期临床的检验监测。有相关研究报道,唾液中可以检测到乙型肝炎病毒[2]。然而,国内并没有特别针对唾液样品的商品化试剂盒。虽国内有相关研究报道,但方法条件不一,且特异度和敏感度均偏低。因此,本研究以唾液为样品,对ELISA条件进行优化,并对改进后的方法进行评价。
1 资料与方法
1.1 一般资料 47例HBsAg血清阳性样本均来自本院住院和门诊患者,其中,男27例,女20例,年龄18~67岁,平均(40±12)岁。HBsAg血清阴性健康对照68例,均为来本院健康体检人员,其中,男36例,女32例,年龄22~56岁,平均(38±8)岁,无乙型肝炎病毒感染史。所有患者均签署知情同意书。
1.2 试剂 购自上海科华公司,均在有效期内使用。
1.3 取样 受检者静脉采血2mL,分离血清,存于-20℃待检。同时嘱被检者随机吐唾液3mL,存于-20℃待检。
1.4 检测方法 血清检测具体方法严格按上海科华公司提供的说明书进行。唾液检测具体方法除以下几点外,均按说明书进行,(1)样品类型:①未处理样本,1mL唾液样本直接用于检测;②样本上清,将2mL唾液样本12 000r/min离心5min取上清;③样本沉淀,将上述离心后的沉淀用2mL蒸馏水重悬。……
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