兰 天，常秀亭，勾红菊，吴 腾，王丽京△，黄河清▲

（1.广东药学院血管生物学研究所，广州 510006；2.中山大学药学院，广州 510006）

肾小球系膜细胞（glomerular mesangial cells，GMC）的增生、肥大及其功能改变如分泌细胞外基质是糖尿病肾病肾小球硬化的主 要 病 理 基 础［1－2］。 磷 酸 鞘 氨 醇 （sphingosine 1－phosphate，S1P）是细胞膜组成成分磷脂的代谢产物，鞘氨醇激酶1（sphingosine kinase 1，SphK1）催化S1P生成，促进细胞存活和保护细胞免受凋亡损伤［3－5］。研究发现，用糖基化终末产物（advanced glycation end products，AGEs）处理 GMC后，发现SphK1活性与S1P增高［6］。鉴于此，本研究采用链脲佐菌素（streptozocin，STZ）诱导的糖尿病肾损伤大鼠模型观察其肾组织SphK1－S1P信号通路的变化，为探寻将SphK1－S1P信号通路作为抗糖尿病肾病的可能作用靶点奠定基础。

1 材料与方法

1.1 实验动物 雄性SD大鼠（175～200g）购自中山大学实验动物中心，在SPF级环境下饲养，自由摄食、饮水。采用新鲜配制的链尿佐菌素（STZ）60mg／kg体质量溶于10mmol／L枸橼酸缓冲液，pH 4.5（Sigma公司），大鼠尾静脉注射复制糖尿病模型。正常对照组注射等体积的枸橼酸缓冲液。采用One－Touch Ultra血糖仪（Johnson ＆Johnson Co.，Milpitas，California，USA）检测血糖。造模后72h测量空腹血糖，大鼠血糖浓度大于16.7mmol／L纳入糖尿病模型标准。糖尿病模型组与正常对照组各8只大鼠，大鼠每周称量体质量，每月测量血糖。实验周期为12周。

1.2 生化分析 在实验结束时，称大鼠体质量，置于代谢笼收集24h的尿液。血肌酐和24h尿蛋白经中山大学第一附属医院病理科分析。大鼠处死后，分离肾脏，称重并一部分固定在4%的多聚甲醛溶液；另一部分液氮速冻后置于－80℃冻存。肾脏肥大指数用肾重体质量比表示。

1.3 肾脏形态学研究 在实验结束、收取完尿液、血液与标本，大鼠处死后、用PBS全身灌流，分离肾脏，然后在4%的多聚甲醛中固定过夜，石蜡包埋。……