贵州3个地域苗族人群mtDNA 9bp序列缺失频率＊

2013-08-24任凌雁王婵娟官志忠单可人

重庆医学 2013年22期

任凌雁，何燕，张婷，王婵娟，王欢，官志忠，单可人

（贵阳医学院分子生物学重点实验室，贵阳 550004）

贵州是一个多民族聚居的地区，有17个世居少数民族，其中苗族人口最多，占全国苗族总人口的50%左右。苗族人群线粒体DNA（mitochondrial DNA，mtDNA）9bp序列缺失标记可能对追踪该民族人群的亲缘关系和迁移路线有所帮助。因为mtDNA 9bp缺失是一个非常有价值的多态性位点，其标准序列是2个串联重复的9bp序列（CCC CCT CTA）［1］，有3种突变型：长型（标准序列前有4个C加入），短型（仅有单拷贝9 bp序列，即9bp缺失），3型（有3拷贝9bp重复）［2］。研究发现，mtDNA 9bp缺失是亚洲人及起源于亚洲的人种的特征［3］，其缺失频率呈现的地理趋势能很好地与史前该地区人类迁移路线相符，现将贵州3个地域苗族人群131例男性的mtDNA 9bp缺失频率的检测分析结果报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料采集来自贵州从江岜沙、黔西沙井、威宁龙街等3个地域苗族人群131例男性个体血样，详见表1。所选对象均为当地健康居民，家系3代内为同一民族，彼此之间无亲缘关系。采样符合知情同意原则。血样均为EDTA－K2抗凝，－70℃暂存至提取基因组DNA。

1.2 DNA提取、定量及标化按常规酚－氯仿法抽提基因组DNA，溶于TE；紫外吸收法定量后取少量统一标化浓度为50 ng／μL，－20℃保存备用。

1.3 mtDNA 9bp的PCR扩增及PAGE检测依据mtDNA修订的剑桥标准序列（revised cambridge reference sequence，rCRS）［4］，用软件 Primer Premier5.0设计引物 P1／P2（序列见表2）进行PCR扩增。25μL PCR反应体系组成为：10×PCR buffer 2.5μL，25mmol／L MgCl21.5μL，4×dNTP（每种2.5 mmol／L）2.0μL，10μmol／L引物各0.4μL，DNA聚合酶1.0 U，模板DNA 50ng。PCR循环条件：94℃变性30s，58℃退火30s，72℃延伸30s，循环30次。PCR产物用10%聚丙烯酰胺凝胶电泳分离，银染后观察结果。