梁 辰，邓子辉，张金英，郝秀华，薛 辉，颜光涛

解放军总医院 基础所生化室，北京 100853

阿尔茨海默病(alzheimer disease，AD)是一种常见的神经退行性疾病，以进行性认知功能障碍为主要临床症状。临床病理研究发现AD患者的痴呆症状严重程度与脑组织中神经元纤维缠结(neurofibrillary tangles，NFTs)数量呈正相关，而NFTs的主要成分是过度磷酸化tau蛋白[1]。因此针对tau蛋白可能成为预防和治疗AD的理想途径。瘦素(leptin)是一种主要由脂肪组织分泌的分子量为16 kU的多肽。它由ob基因编码，含有167个氨基酸，而血液中的leptin是去掉N端21个氨基酸残基的信号肽后形成的146个氨基酸的多肽[2]。具有抑制食欲、增加能量消耗、促进脂肪分解、减轻体重等生物学功能。近年的研究发现，瘦素受体(ObR)在脑内广泛表达，分布在下丘脑、海马、小脑和大脑皮质等，瘦素作用于这些脑区可改变神经元或突触的结构、功能及其可塑性，影响神经元存活或增殖，并改善学习、记忆及其他认知功能[3-4]。本研究通过检测AD细胞模型中磷酸化tau蛋白水平的变化情况，探讨leptin与阿尔茨海默病的整体关系，以及leptin对磷酸化tau蛋白的调节作用。

材料和方法

1 材料 人神经纤维母细胞瘤细胞系SH-SY5Y(本实验室保存)；DMEM培养基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶(Gibico)；三羟甲基氨基甲烷(Tris)(北京益利精细化学品公司)；Western Blot超敏发光液、RIPA裂解液、Trizol RNA提取试剂、BCA蛋白定量试剂盒(北京普利莱基因技术公司)；一抗：p-tau(ser396)(sc-101815)、tau(TAU-5)(sc-58860)、Actin(sc-1616-R)、Ob-R(sc-8391)(Santa Cruz Biotechnology)；二抗：山羊抗小鼠IgG/辣根酶标记、山羊抗兔IgG/辣根酶标记(北京中杉金桥公司)。Human Ob-Rb：94 ℃ 50 s，55 ℃ 50 s，72 ℃ 1 min，40循环，72 ℃ 10 min。Forward：5'-GCCAACAACT GTGGTCTCTC-3'；Reverse：5'-AGAGAAGCACTTG GTGACTG-3'。内参GAPDH 246 bp，95 ℃ 50 s，54 ℃50 s，72 ℃ 1 min，30循环，72 ℃ 7 min。Forward：5'-CCCCTTCATTGACCTCAACTAC-3'；Reverse：5'-G AGTCCTTCCAGGATACCAAAG-3'(北京赛百盛公司)。

2 MTT法检测ATRA浓度梯度对细胞活性的影响将SH-SY5Y消化、收获、计数，各组取5×104/ml细胞100 μl接种到96孔板，每组两列10个平行孔。……