周臻涛林小军

1.中山大学附属梅州市人民医院肿瘤外一科，广东梅州514031；2.中山大学肿瘤防治中心肝胆肿瘤外科，广东广州510060

垂体肿瘤转化基因1(Pituitary Tumor Transforming Gene 1,PTTG1)是一种新的癌基因,于1997年首先克隆自大鼠垂体肿瘤[1]。随后于1998年自人睾丸中克隆出人PTTG1,位于5号染色体长臂5q33[2]。体外实验显示,该基因在小鼠成纤维细胞中过表达可导致细胞转化,体内实验则显示可促进肿瘤的形成[1]。在所有被研究的肿瘤细胞(包括肺癌、乳腺癌、结肠癌、垂体肿瘤等)中都有高表达，并与肿瘤的侵袭性相关[2-6]。有关PTTG1在肝细胞癌表达的研究报道较少，2009年1月—2012年期间该研究检测原发性肝细胞癌（hepatocellular carcinoma HCC）组织及相应癌旁肝组织中PTTG1蛋白的表达情况，旨在探讨其临床意义。现报道如下。

1 资料与方法

1.1 一般资料

收集该院行根治性切除，且临床病理资料完整的肝细胞癌病例标本及相应的癌旁肝组织79例，均经病理组织学证实为肝细胞癌。其中男性69例，女性10例；年龄17～72岁，中位年龄49岁；HBsAg阳性73例；肝功能Child-Pugh分级，Child-A级78例，Child-B级1例；无肝硬化19例，轻度肝硬化39例，中度肝硬化18例，重度肝硬化3例；肝癌组织按Edmondson病理分级标准进行分级，Ⅰ级6例，Ⅱ级41例，Ⅲ级28例，Ⅳ级4例；按2001年第八届全国肝癌学术会议提出的肝癌临床分期标准进行分期，I期27例，II期52例，无Ⅲ、Ⅳ期患者。所有标本均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续石蜡切片，厚4 μm，每个腊块切片3张，2张免疫组化染色，另一张作HE染色。

1.2方法

免疫组织化学检查采用EnVision两步法。浓缩型兔抗人PTTG1多克隆抗体购自北京中杉金桥生物技术有限公司，工作液浓度1∶200。即用型免疫组化chemMate TM EnVision二抗试剂盒购自DaKo公司。实验步骤按试剂盒说明书进行，最后DAB显色。以试剂公司提供的阳性对照片作为阳性对照，以磷酸盐缓冲液代替一抗作为阴性对照。

1.3结果判断

在普通光学显微镜下阅片，在高倍镜下（400×）随机观察5～10个视野，观察细胞浆的染色深浅和计算胞浆阳性的细胞所占的百分比。染色结果判定标准参照Fromowitz等[7]阳性细胞半定量分级法，在高倍镜下对细胞染色作如下评分：根据阳性细胞占整个肿瘤细胞的百分数打分：＜5%为0分，5%～25%为1分，26%～50%为2分，51%～75%为3分，＞75%为4分。根据阳性细胞染色深浅打分：无着色为0分，淡黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为 3 分；两项结果相加＜2 分为阴性(-)，2～3 分为弱阳性(+)，4～5分为中度阳性(++)，6～7 分为强阳性(+++)，其中-～+视为低表达，++～+++视为高表达。以上结果均由2位病理科医师采用双盲法观察并确定。

1.4 统计方法

数据资料统计分析采用SPSS13.0统计学软件进行，计数资料采用χ2检验。

2 结果

2.1 PTTG1在肝癌组织、癌旁肝组织及正常肝组织中的表达

PTTG1在上述各组织中阳性染色位于细胞浆，呈棕黄色颗粒状，细胞核染色为阴性。在肝癌组织、癌旁肝组织中PTTG1高表达率分别为53.2%、1.3%。两组间差异有统计学意义（P=0.000＜0.05），见表 1。

表1 2种组织中PTTG1的表达情况[n（%）]

2.2 肝癌组织中PTTG1的表达与临床病理指标的关系

免疫组化结果显示PTTG1的表达水平与卫星结节，Edmondson病理分级密切相关。PTTG1在无卫星结节组和有卫星结节组高表达率分别为39.7%、68.7%，两组差异有统计学意义（P＝0.037＜0.05）；PTTG1 在 Edmondson 分级Ⅰ、Ⅱ组和Ⅲ、Ⅳ组高表达率分别为 38.3%、62.5%，两组差异有统计学意义（P＝0.035＜0.05）。PTTG1 表达水平与性别、年龄、AFP、HBsAg、肝硬化程度、ICGR15、TNM分期、肿瘤大小及肿瘤包膜状况无关（P>0.05）。见表2。

表2 肝癌组织中PTTG1表达与其临床病理指标的关系[n（%）]

3 讨论

PTTG1基因是一种癌基因，体外实验显示，该基因在小鼠成纤维细胞中过表达可导致细胞转化，体内实验则显示可促进肿瘤的形成。PTTG1是Ramaswamy等[2]报道的17种与原发性实体肿瘤转移有关的基因之一。目前认为PTTG1促进肿瘤发生发展的作用机制主要有以下几个方面:①作为保全素(Securin)可抑制分裂期细胞姊妹染色单体的分离,使子代细胞非整倍体化，增加突变几率，促进肿瘤表型恶化；②PTTG1蛋白中含有的PXXP基序可与多种细胞内接头蛋白的SH3域结合,通过募集多种胞内信号分子,将生长刺激信号传至核内,激活多种肿瘤相关基因的表达,使细胞发生转化；③PTTG1可上调bFGF，后者可诱导肿瘤组织新生血管形成，促进肿瘤生长、侵袭与转移。有关PTTG1在肝癌组织中表达的研究国内外文献报道不多，Fujii等[8]报道肝癌组织中PTTG1 mRNA表达水平明显高于癌旁肝组织，PTTG1蛋白在肝癌组织中高表达，定位在胞浆，而在癌旁肝组织中不表达。Su等[9]采用RT-PCR方法检测147例肝癌组织发现PTTG1 mRNA高表达率为61%（80/147）。该实验通过免疫组化的方法研究表明PTTG1阳性染色定位于细胞浆中，在肝癌组织中高表达率53.2%，明显高于癌旁组织的高表达率1.3%(P<0.05)，提示PTTG1在原发性肝细胞癌的发生过程中可能起着某种作用，推测这种作用可能与PTTG1的促进细胞增殖与恶性转化功能有关，但其确切的作用机制还有待进一步研究。

有关PTTG1与临床病理指标的研究，在其他肿瘤中的研究较多。Rehfeld等[10]报道在非小细胞肺癌 （nonsmall-cell lung cancer，NSCLC）中，PTTG1高表达的患者淋巴结转移，远处转移发生率高。在结肠癌中的研究[11]表明有周围淋巴结浸润的结直肠癌较局限于肠壁的结直肠癌有更高的PTTG1表达。Wen[12]等研究发现PTTG1与胃癌的淋巴结转移有关。有关PTTG1的表达与肝细胞癌临床病理指标关系的研究，国内外文献报道较少。该研究表明，PTTG1的表达水平与卫星结节、病理分级有关，即有卫星结节、分化程度差者PTTG1高表达率较无卫星结节、分化程度好者要高，而与患者性别、年龄、AFP水平、肝炎状态、肝硬化程度、肝功能储备情况、TNM分期、包膜情况及肿瘤大小无关。卫星结节、病理分级可反映肝细胞癌恶性程度的高低，与肝细胞癌的预后密切相关。PTTG1高表达与卫星结节有关，提示PTTG1可能参与肝癌的侵袭转移过程。肿瘤的病理分级反映了肿瘤细胞的分化程度，病理分级越高，分化程度越差，而肿瘤细胞分化越差则恶性程度越高，PTTG1在病理分级高的肝癌中高表达率升高，提示PTTG1可能通过某种机制抑制了肝癌细胞的分化，增强了肝癌的恶性生物学行为。

肝癌的发生发展是一个十分复杂的过程，该研究中显示肝癌组织中PTTG1的表达明显高于癌旁肝组织及正常肝组织，肝癌组织中PTTG1的表达水平与卫星结节、Edmondson病理分级相关，提示PTTG1可能在肝癌的发生过程中起着重要作用，并可能参与肝癌的侵袭转移过程，但具体机制还有待进一步研究。

[1] McCabe C J,Gittoes N J.PTTG--a new pituitary tumour transforming gene[J].J Endocrinol,1999,162(2):163-166.

[2] Ramaswamy S,Ross K N,Lander E S,et al.A molecular signature of metastasis in primary solid tumors[J].Nat Genet,2003,33(1):49-54.

[3] Yu R,Melmed S.Pituitary tumor transforming gene:an update[J].Front Horm Res,2004,32:175-185.

[4] Zhang X,Horwitz G A,Prezant T R,et al.Structure,expression,and function of human pituitary tumor transforming gene(PTTG)[J].Mol Endocrinol,1999,13(1):156-166.

[5] Puri R,Tousson A,Chen L,et al.Molecular cloning of pituitary tumor transforming gene 1 from ovarian tumors and its expression in tumors[J].Cancer letters,2010,163(1):131-139.

[6] Hunter J A,Skelly R H,Aylwin S J,et al.The relationship between pituitary tumour transforming gene(PTTG)expression and in vitro hormone and vascular endothelial growth factor(VEGF)secretion from human pituitary adenomas[J].Eur J Endocrinol,2013,148(2):203-211.

[7] Fromowitz F B,Viola M V,Chao S,et al.Ras p21 expression in the progression of breast cancer[J].Hum Pathol,1987,18(12):1268-1275.

[8] Fujii T,Nomoto S,Koshikawa K,et al.Overexpression of Pituitary Tumor Transforming Gene 1 in HCC Is Associated With Angiogenesis and Poor Prognosis[J].Hepatology,2006，43(6):1267-1275.

[9] Su M C,Hsu H C,Liu Y J,et al.Overexpression of pituitary tumortransforming gene-1 in hepatocellular carcinoma[J].Hepatogastroenterology，2006,53(68):262-265.

[10] Rehfeld N,Geddert H,Atamna1 A,et al.The influence of the pituitary tumor transforming gene-1(PTTG-1)on survival of patients with small cell lung cancer and non-small celllung cancer[J].Journal of Carcinogenesis,2006,5(1):4.

[11] Heney A P,Singson R,McCabe C J,et al.Expression of pituitary tumor transforming gene in colorectal tumors[J].Lancet，2000,355(9205):716-719.

[12] Wen C Y,Toshiyuki N,Wang A P，et al.Expression of pituitary tumor transforming gene in human gastric carcinoma[J].World J Gastroenterol,2004，10(4):481-483.