李 佳，陆会平，冯振博，莫伟嘉

（广西医科大学第一附属医院病理科，南宁 530021）

在细胞培养过程中，经常需要冻存一部分细胞，避免培养细胞表型的改变而导致重复实验条件不一的状况，并为进一步的实验保存状态良好的细胞。细胞一般采用液氮低温保存，冻存及复苏时必须遵循“慢冻快融”的原则。本课题组在冻存慢病毒转染肝癌细胞株HepG2细胞时，尝试了多种不同配方的细胞冻存液，最后筛选出一种理想的可用于液氮保存慢病毒转染后HepG2细胞的冻存液。

1 材料与方法

1.1 材料与仪器 细胞株HepG2细胞及其慢病毒转染后稳转细胞株为本实验室保存。完全DMEM培养基由南京凯基生物科技发展有限公司提供，胎牛血清（FBS）由杭州四季青提供，胰酶由碧云天生物技术研究所提供，甘油和二甲基亚砜（DMSO）由北京索莱宝科技有限公司提供。－20℃冰箱由海尔电器公司提供，－80℃超低温冰箱由日本三洋公司提供，普通高速离心机由德国Eppendorf公司提供，酶标仪 Model－450由美国Bio－Rad公司提供，液氮罐为本实验室保存。

1.2 方法

1.2.1 冻存方法 常规胰酶消化细胞，用完全培养基终止消化，轻轻吹打细胞成单细胞悬液，1000r／min离心1min后弃去上清液，分组加入以下冻存液：分别采用甘油和DMSO为保护剂，按以下配方各配备4种比例冻存液。（1）A液，DMEM∶FBS∶保护剂＝7∶2∶1；（2）B液，DMEM∶FBS∶保护剂＝6∶3∶1；（3）C液，DMEM∶FBS∶保护剂＝5∶4∶1；（4）D液，DMEM∶FBS∶保护剂＝0∶9∶1。然后轻轻混匀，冻存前统一调整细胞密度到1×106个／毫升，将细胞悬液移至冻存管，每管1.5mL，梯度降温冻存，将冻存管置于4℃冰箱30min，－20℃60～120min后转移至－80℃过夜（16h），转至液氮保存。……