徐艳丽，李青菊

（郑州大学第二附属医院内分泌科 450014）

近年来他汀类药物对糖尿病肾病非依赖降脂的肾脏保护作用越来越受到人们的重视。糖尿病肾病早期病理特征为肾小球系膜细胞的增殖与肥大［1］。p27是一种重要的细胞周期激酶抑制剂，其在肾小球系膜细胞增殖与肥大过程中起到重要作用［2］。他汀类药物是否通过影响p27蛋白的表达来发挥非依赖降脂的肾脏保护作用目前还不完全清楚。本实验采用体外培养大鼠肾小球系膜细胞，观察辛伐他汀及阿托伐他汀对高糖刺激大鼠肾小球系膜细胞p27蛋白表达的影响，以探讨他汀类药物的非依赖降脂肾脏保护的作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料 大鼠肾小球系膜细胞株（中国科学院典型培养物保藏委员会，细胞数量5×107），葡萄糖浓度为5.6mmol／L的低糖DMEM（细胞培养基）培养液（Thermo公司），Trizol试剂（Invitrogen公司），逆转录试剂盒（Fermentas公司），辛伐他汀（Merck公司），阿托伐他汀（辉瑞制药有限公司），兔抗p27单克隆抗体（CST公司），鼠抗β－actin单克隆抗体（武汉博士德公司）等。

1.2 方法

1.2.1 细胞培养及分组 将大鼠肾小球系膜细胞置于含5%CO2，37℃的培养箱中，用含10%胎牛血清的低糖DMEM培养液进行常规培养，每2天换液1次，待细胞铺满整个培养瓶底的80%时可行传代培养。传至第5～6代可进行实验。实验前24h用不含胎牛血清的DMEM培养基进行培养。细胞分为4组（各组细胞数量106）：正常对照组：培养液中葡萄糖浓度为5.6mmol／L；高糖组：葡萄糖浓度为30mmol／L；高糖辛伐他汀组：葡萄糖浓度为30mmol／L，辛伐他汀浓度为10μmol／L；高糖阿托伐他汀组：葡萄糖浓度为30mmol／L，阿托伐他汀浓度为10μmol／L。……