曾 源，杨 威，张小强，李 斌，董 啸

（南昌大学医学院第二附属医院心胸外科，江西南昌 330006）

前B细胞克隆增强因子（PBEF）是一种具有调控炎症、糖脂代谢、氧化应激和细胞凋亡等多种作用的分子，并参与内皮血管形成、心脏保护效应、炎症和免疫应答等［1－2］。PBEF通过抑制中性粒细胞凋亡、介导炎症因子产生、调控肺血管上皮细胞和内皮细胞的通透性等途径在急性肺损伤中起到非常重要的作用［3－4］。本研究建立大鼠模型以分析PBEF在体外循环（CPB）术后肺血管内皮通透性增加中的机制，现报道如下。

1 材料与方法

1.1 动物模型和分组 动物模型由南昌大学心血管病研究所提供，成熟雄性昆明种小鼠，体质量250～300g。进行动物分组，每组10组，对照组：大鼠只进行麻醉、CPB插管，不行CPB转流；A组：大鼠行慢病毒AD－PBEFshRNA转染；B组：大鼠进行30min深低温停循环；C组：大鼠行慢病毒AD－PBEF－shRNA转染后，再进行30min深低温停循环。

1.2 方法

1.2.1 组织标本采集 大鼠处死后取右肺前叶用于肺组织湿干重比的测定，右肺中后叶固定于4%甲醛溶液中，乙醇脱水，石蜡包埋，切片成4μm厚。组织脱蜡后，用苏木精和伊红染色供病理观察。取左肺等分置于两个冻存管中，放入－80℃液氮中急冻保存，留待 Western blotting和酶联免疫吸附试验（ELISA）检测。

1.2.2 Western blotting和ELISA检测 Western blotting检测：取出－80℃保存左肺组织，提取细胞总蛋白，电泳转膜，进行一抗和二抗结合反应，避光室温振摇孵育1h，洗膜，荧光系统扫描，以β－actin作为内参照，计算机记录每个条带的灰度积分值，以样品积分值／内参照积分值比值进行统计学分析。检测包括PBEF表达，磷酸化P38MAPK、磷酸化ERK、磷酸化MLC、磷酸化VE－cadherin、磷酸化FAK表达。……