李新军，韩杨云，徐 宏△，杨 忠，曾 义，孙中书，李红丽，龙晓东，游 潮

（1.四川省德阳市人民医院神经外科 618000；2.第三军医大学神经生物教研室，重庆 400038；3.四川省人民医院神经外科，成都 610041；4.四川大学华西医院神经外科，成都 610041）

神经管缺陷（neural tube defects，NTD），在所有的新生儿缺陷中发病率居第一位，是在胚胎发育过程中由于神经管闭合不全引起的一种缺陷［1］。基因芯片指将许多特定的寡核苷酸或基因片段作为探针有规律地排列固定于支持物上，样品RNA经同位素或荧光标志后进行杂交，应用计算机系统对杂交信号检测分析，从而得出相应的生物信息。基因芯片技术的应用为在分子水平研究复杂的生理病理过程或信号通路提供了迄今最有力的工具。由于NTD基因表达及调控过程复杂多变，国内外研究较少。P57kip2、蛋白激酶5（CDK5）作为重要的细胞周期相关因子在神经系统发育中的作用机制尚不十分清楚。本课题组通过动物实验和基因芯片分析，比较了胚胎9.5、10.5d正常与同期NTD小鼠神经管组织的P57kip2、CDK5的基因表达差异，并对其进行杂交验证。以求发现二者与NTD发生和神经胚的密切联系，并探讨其可能的分子机制。

1 材料与方法

1.1 材料 120只成年昆明种小鼠，鼠龄55～65d，体质量22～28g，无特异病原体，雌雄各半，由第三军医大学实验动物中心提供（动物质量合格证号：SCXK（渝）2007003）。实验中对动物处置方法符合动物伦理学要求。

1.2 主要实验试剂和仪器 TRIZOL试剂、SuperScriptⅡ逆转录酶、OligodT12－18随机引物、Rnase抑制剂购自 Gibco－BRL公司；维甲酸（RA）购自美国Sigma公司；5×缓冲液，dATP、DCTP、dGTP、dTTP，0.1MDTT，Poly dA，Yeast tRNA，CoT－1DNA 购自美国 Life technology公司；……