徐君毅 以敏 黄世锋△

（1广西医科大学第四附属医院普外一病区 广西柳州 545005；2广西中医药大学第一附属医院病理科 广西南宁 530021）

1986年Rovesdi［1］等在研究腺病毒感染细胞的核抽提物与腺病毒的E2启动子相互作用时发现了E2F家族的存在。E2F－1属细胞周期相关转录因子E2F家族成员之一，参与构成细胞核和转录因子复合物，与调控细胞周期和肿瘤的发生发展有着紧密的联系。为研究E2F－1在结直肠癌中的表达及临床意义，本研究采用免疫组化和蛋白印迹技术对35例原发性结直肠癌标本的E2F－1表达情况进行检测，探讨E2F－1蛋白表达与临床病理指标的关系。

1 材料与方法

1.1 标本来源 收集广西医科大学第四附属医院普外一病区2008年6月至2009年2月间经病理确诊的35例原发性结直肠癌手术切除标本。术中标本离体后，分别收取癌灶组织和距离癌灶边缘5cm以上无癌浸润的全层肠壁组织各两块，分别作为肿瘤组和癌旁对照组。所有癌旁对照组标本HE染色镜下无癌浸润。液氮中速冻10min后置于－70℃冰箱保存。

1.2 主要试剂 鼠抗人E2F－1单克隆抗体由美国Santa Cruz公司提供，辣根过氧化物酶（HRP）标记的山羊抗鼠抗体、SP染色试剂盒、DAB显色试剂盒均由北京中杉生物技术公司提供。

1.3 免疫组化 标本经10%中性福尔马林固定，常规脱水，石蜡包埋，切片厚度4μm。肿瘤组和癌旁对照组均经HE染色后阅片证实。标本常规二甲苯脱蜡，梯度乙醇水化，柠檬酸缓冲液pH6.1高温高压抗原修复2min后，10%过氧化氢和小牛血清分别作用30min。滴加稀释的一抗（稀释浓度为1∶200），湿盒内4℃孵育过夜，二抗和SP复合物孵育30min，每步骤间10%PBS洗片各3次，每次5 min。……