林 琳 柳爱华 陈惠琴 陈晶儿 邓志敏

1.广东医学院附属南山医院妇科，广东深圳 518053；2.广东省深圳市宝安区人民医院妇科，广东深圳 518101

基质金属蛋白酶（MMPs）是参与细胞外基质降解和重塑正常组织的重要酶类，正常情况下MMPs和其组织抑制物（TIMPs）维持着一个动态平衡，该平衡对妊娠建立极为关键[1]。本研究通过对反复自然流产患者（实验组）和正常早孕需终止妊娠者 （对照组）血清基质金属蛋白酶9（MMP-9）和其抑制剂（TIMP-1）水平进行检测和临床应用价值评价，以探讨其与相应指标表达的关系，从分子水平研究反复自然流产患者的发病相关因素。

1 材料与方法

1.1 材料

收集 2010年7月～2012年3月深圳市宝安区人民医院妇产门诊，其中反复自然流产（实验组）血清30份；采集正常早孕需终止妊娠者（对照组）血清30份，上述病例均符合下列条件：孕周＜12周；无其他急、慢性病史。排除以下因素：①染色体异常；②内分泌异常；③子宫畸形；④血栓形成倾向；⑤免疫因素；⑥感染因素。对照组：选择同期就诊要求行人工流产患者30例。妊娠周数均≤8周，患者无慢性高血压、肝肾及血液系统疾病及急性炎症。两组研究对象年龄、健康状况差异均无统计学意义（均P＞0.05），具有可比性。所有患者均用肝素抗凝管空腹取静脉血，分离血浆，测MMP-9及TIMP-1的含量。

1.2 试剂

采集患者入院后第2天的空腹静脉血3 mL，4 000 r/min离心5 min后吸取血清，-75℃下保存备测。人血清MMP-9和TIMP-1定量酶联检测试剂盒 （美国Biosourc公司），酶联免疫吸附测定（ELISA）检测：按双抗体夹心ABC2 ELISA法试剂说明操作，对标本和试剂盒提供的标准品进行一次性检测。

1.3 双抗体夹心ABC2 ELISA法检测：

采用0.05MPH9碳酸盐包被抗体稀释至蛋白质含量为1～10μg/mL。每个反应孔添加0.1 mL，4℃过夜。次日去掉孔内溶液并洗涤3次，每次3 min。加标本样品0.1 mL于反应孔中，置37℃下孵育1 h。然后洗涤。于反应孔中加酶标抗体0.1 mL，37℃孵育0.5～1.0 h，洗涤。最后加TMB底物 0.1 mL，37℃下 10～30 min。

1.4 评价标准[2]

于白色背景上，直接用肉眼观察结果：反应孔内颜色越深，阳性程度越强，阴性反应为无色或极浅，依据所呈颜色的深浅，以“+”、“-”号表示。 也可测OD值：在ELISA检测仪上，于450 nm（若以ABTS显色，则 410 nm）处，以空白对照孔调零后测各孔OD值，若大于规定的阴性对照OD值的2.1倍，即为阳性。

1.5 统计学方法

数据采用SPSS 15.0软件包进行处理，计量资料数据以均数±标准差（x±s）表示，比较采用t检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

反复自然流产患者（实验组）血清30份，正常早孕需终止妊娠者血清30份，测MMP-9和TIMP-1水平：在正常早孕的血清中MMP-9含量均明显高于反复自然流产者，在正常早孕的血清中TIMP-1的含量低于反复自然流产者，差异均有高度统计学意义（均P＜0.01）。见表1。

表1 两组患者血清MMP-9和TIMP-1水平比较（x±s，ng/mL）

3 讨论

反复自然流产是指连续发生2次或2次以上的自然流产，病因十分复杂，确切机制尚不明确，可能是多因素共同作用的结果，目前所了解的病因主要包括、遗传、内分泌、感染、免疫等因素[3]。MMPs家族是一类活性依赖于锌离子和钙离子的蛋白水解酶，主要的生理作用是降解细胞外基质（ECM）[4]。MMPs由 5 个结构域（除 MMP-7 外）组成：信号肽域、前肽域、催化域、铰链区、血红素结合蛋白样或纤维结合素样的COOH末端域。MMPs在生理状态下参与胚胎形成，并与一系列妊娠疾病的发病机制有关[5-6]。MMP-9在排卵前后表达最强，在着床期前后分泌入腺腔和宫腔液中，与胚胎识别有关[7-8]。

本实验选取的病例数据显示，在正常早孕的血清中MMP-9的含量均明显高于反复自然流产者，在正常早孕的血清中TIMP-1的含量低于反复自然流产者，笔者查阅和收集了大量有关MMPs及TIMPs与反复流产的相关性的国内外研究的最新文献，初步阐明正常早孕者绒毛组织的侵袭力强于反复自然流产者[9-10]；TIMP-1含量在正常早孕组中明显低于反复自然流产组，表明在反复自然流产者中绒毛侵袭力相对较弱，可能与反复自然流产的发生相关。本实验目前病例研究初步表明，TIMP-1含量较多可显著减少MMP-9活化及侵袭能力，二者之间可能呈负相关。据此，笔者推测，TIMP-1可能通过抑制明胶酶活化，从而抑制滋养细胞的侵袭能力，参与早孕滋养细胞浸润调控。

反复自然流产机制尚不明确。而反复自然流产是妇产科常见病、多发病，严重影响妇女精神健康，给家庭和谐带来不同程度影响并产生巨大的经济压力。因此，探讨反复流产患者是否存在MMPs和（或）TIMPs的表达异常，针对性预防和治疗，能够为不孕患者或辅助生殖技术的研究提供新思路。本研究因关注点的特殊性，从分子水平为进一步明确反复自然流产发病原因提供有力证据。

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