金 鑫，杜振中

(浙江众益制药股份有限公司，浙江 丽水 323000)

氨酚羟考酮片为对乙酰氨基酚与盐酸羟考酮组成的复方制剂，临床上主要用于各种原因引起的中、重度，急、慢性疼痛。现行氨酚羟考酮片标准收载于美国药典和中国生物制品检定所进口药品复核标准(28)中，上述标准中均未对有关物质进行控制。本文参考相关文献，建立了检测氨酚羟考酮片有关物质的高效液相色谱法。结果表明，此方法准确可靠、重复性好、专属性强，有利于更好地控制该药品的质量。

1 仪器与试药

Agilent 1260型高效液相色谱仪，DAD检测器。氨酚羟考酮片(浙江众益制药股份有限公司，批号分别为 130104，130105，130106);盐酸羟考酮对照品(浙江省食品药品检验所，含量为99．5%);甲醇为色谱纯，磷酸二氢钾、氢氧化钾、正壬胺、磷酸均为分析纯。

2 方法与结果

2．1 色谱条件

色谱柱:Diamonsil C18柱(250 mm ×4．6 mm，5．0 μm);流动相:磷酸盐溶液[(1 000 mL水中，加入950 mg磷酸二氢钾，加1 mL磷酸，振摇溶解，加入1 mL正壬胺，振摇得澄清溶液，用氢氧化钾试液调 pH 至(4．9±0．1)]-甲醇(90∶10);柱温:40℃;检测波长:214 nm;流速:1．0 mL/min;进样量:10 μL。

2．2 测定方法

取样品粉末适量(约相当于羟考酮5 mg)，精密称定，置100 mL容量瓶中，加流动相适量超声使其完全溶解并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液;另精密量取供试品溶液1 mL置100 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照溶液。精密量取对照溶液10 μL注入高效液相色谱仪，调节检测灵敏度，使主成分峰高约为满量程的10%～25%，再精密量取上述2种溶液各10 μL，分别注入高效液相色谱仪，记录色谱至对主峰保留时间的2倍，供试品溶液色谱图中如有杂质峰(扣除辅料峰)，各杂质峰面积的和不得大于对照溶液主峰面积(1．0%)。

2．3 专属性试验

图1 氨酚羟考酮片有关物质高效液相色谱图

称取空白辅料(按处方配比混合)适量，置100 mL容量瓶中，加流动相适量，超声使其溶解并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得空白辅料溶液。称取样品粉末适量(约相当于羟考酮5 mg)，置100 mL容量瓶中，加流动相适量超声使其溶解完全并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得未破坏供试品溶液。称取样品粉末适量(约相当于羟考酮5 mg)，置100 mL容量瓶中，加入1 mol/L盐酸溶液5 mL放置约4 h，另加1 mol/L氢氧化钠溶液5 mL中和后，加流动相适量超声使其溶解完全并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得酸破坏溶液。称取样品粉末适量(约相当于羟考酮5 mg)，置100 mL容量瓶中，加入1 mol/L氢氧化钠溶液5 mL放置约4 h，另加1 mol/L盐酸溶液5 mL中和后，加流动相适量超声使其溶解完全并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得碱破坏溶液。称取样品粉末适量(约相当于羟考酮5 mg)，置100 mL容量瓶中，加入5%过氧化氢溶液5 mL放置约4 h，加流动相适量超声使其溶解完全并稀释至刻度，摇匀，滤过，即得氧化破坏溶液。取供试品溶液，水浴90 min，滤过，即得高温破坏溶液。取供试品溶液，强光(4 500 lx)下照射24 h，滤过，即得光照破坏溶液。

分别取上述滤液各10 μL注入高效液相色谱仪，记录色谱图，见图1。结果表明，本品主药与其降解物质的分离效果令人满意，辅料在此条件下无干扰。可见，此法可将氨酚羟考酮片与其有关物质及可能降解的杂质完全分离。

2．4 稳定性试验

取供试品溶液，分别于 0，1，2，4，6，8，12 h 时进样测定。计算峰面积的 RSD为1．32%。表明本品在12 h内稳定性较好。

2．5 检出限确定

取盐酸羟考酮对照品制成1 g/L的溶液依次稀释后进样测定，盐酸羟考酮质量浓度为0．005 μg/mL时，信噪比 S/N≈3．0，最低检出限为0．05 ng。

2．6 样品含量测定

取样品粉末适量(约相当于羟考酮5 mg)，精密称定，置100 mL容量瓶中，加流动相适量超声使其溶解完全并稀释至刻度，摇匀，过滤，取续滤液作为供试品溶液;另精密量取供试品溶液1 mL置100 mL容量瓶中，加流动相稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。照拟订方法测定，结果见表1。结果表明，批号分别为130104，130105，130106的三批样品总杂质含量分别为0．029%，0．025%，0．028%，均小于 1．0% 。

3 讨论

取盐酸羟考酮对照品溶液适量，加流动相稀释后，在190～300 nm波长范围内进行扫描，结果在214 nm处有最大吸收，故选择214 nm为测定波长。

在流动相条件确定与优化时，研究了流动相中pH对主峰出峰时间的影响。结果显示，当磷酸盐溶液(氢氧化钾试液调pH至6．0)-甲醇(90∶10)时，主峰出峰时间过快，杂质峰不能很好分离;当磷酸盐溶液(氢氧化钾试液调pH至4．0)-甲醇(90∶10)时，主峰出现明显拖尾现象;当磷酸盐溶液(氢氧化钾试液调pH至4．9)-甲醇(90∶10)时，主峰保留时间适中，杂质与主峰分离效果好。因此，最终选定磷酸盐溶液(氢氧化钾试液调pH至4．9)-甲醇(90 ∶10)为流动相。