曹燕卿，杨丹凤，张竞丹，李 曦，安玉林，刘嘉瀛，汪 海

（军事医学科学院卫生学环境医学研究所，天津300050）

人体只有维持适宜的体温，才能保持正常的生理功能。当机体温度降低时，机体不可避免地出现各种变化，对机体的器官、组织和细胞的功能产生较大影响。如果冷环境的作用强度超出人体体温的调控能力，将引起人体局部或全身的温度改变，甚至造成全身或局部的冷损伤［1，2］。以往通过动物冻伤模型和主动脉血管内皮细胞冷冻暴露模型研究发现，血管内皮细胞是冷诱导冻伤发生的重要靶点和始动因素［3，4］，但是不同低温暴露常可导致皮肤出现不同的病理变化［2］，而关于不同低温暴露致皮肤血管内皮损伤机制的研究鲜有报道，因此本研究拟通过体外建立大鼠真皮微血管内皮细胞（dermal microvasvcular endothelial cells，DMVECs）低温暴露模型，进一步探讨冷诱导皮肤病变的相关机制，为冷损伤预防及冷习服机制研究提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

SPF级Wistar大鼠乳鼠（军事医学科学院动物中心），MCDB131培养基、II型中性蛋白酶（美国sigma公司），I型胶原酶、Trizol试剂（美国 Gibco公司），Percoll溶液（美国 Pharmacia公司），胎牛血清（美国Hyclone公司），ECGS（美国 Upstate公司），真皮微血管内皮细胞鉴定试剂盒（武汉Pricell公司），乳酸脱氢酶检测试剂盒（南京建成），PCR引物（上海invitrogen公司），PCR相关试剂（北京TIANGEN公司）。

1.2 主要仪器

常温及低温细胞培养箱（美国Thermo公司），低温细胞培养箱为本室设计（通5%CO2，21%O2，74%N2），酶标仪（瑞士 Tecan公司），PCR仪、紫外凝胶成像系统（美国Bio-Red公司），DNA电泳设备（北京六一仪器厂）。

1.3 大鼠真皮微血……

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