吴 博,冯彦红,刘重斌,赵惠玲,王一龙,陈锡文△

(1.温州医学院实验动物中心,浙江温州 325035;2.石家庄市妇幼保健院,河北 石家庄 050091;3.湖州师范学院医学院生理教研室,浙江 湖州 313000)

解偶联蛋白(uncoupling protein,UCP)是一类位于线粒体内膜上的质子转运蛋白,通过消除线粒体膜电位,使底物氧化与ADP磷酸化脱偶联,减少ATP的合成,进而使能量以热能的形式释放[1]。由于UCP可能参与调节机体能量代谢,因此与肥胖发生发展的关系日益引起人们的关注。目前UCP已被列为肥胖症的候选基因[2]。研究表明,经过重复性“饥饿/再投喂”饲喂方式的处理,能激活大鼠体内瘦素(leptin)调节能量平衡以控制体重这一调节系统[3]。禁食及各种与脂代谢相关的激素水平的改变,是研究与能量代谢相关的UCP表达调控因素的有利实验条件。本研究通过观察经过重复性“饥饿/再投喂”处理大鼠摄取高脂食物(可以诱导正常鼠产生单纯性肥胖症)时,大鼠脂肪组织UCP2和肌肉组织UCP3的表达变化,旨在进一步探讨UCP对脂代谢的调节作用及其可能机制,为有效治疗肥胖提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 试剂 葡萄糖(Glucose)、游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)测试盒,南京建成生物工程研究所;胰岛素(Insulin)放射免疫试剂盒,北京北方生物技术研究所;Trizol试剂盒,美国 Invitrogen公司;BcaBESTTM RNA PCR Kit Ver.1.1,大连宝生物工程有限公司;PCR引物合成,上海捷瑞生物工程有限公司;山羊抗大鼠UCP2、UCP3和GAPDH多克隆抗体,美国Santa Cruz公司;辣根过氧化物酶标记的兔抗山羊IgG,北京中杉金桥生物技术有限公司;BCA蛋白浓度测定试剂盒,碧云天生物技术研究所;ECL化学发光检测试剂盒,美国Thermo公司;其余试剂均为市售分析纯。……