郭慧芳，徐 倩

(承德医学院，河北承德 067000)

黄芩茎叶总黄酮对Hela细胞增殖的影响

郭慧芳，徐 倩

(承德医学院，河北承德 067000)

目的:探讨黄芩茎叶总黄酮对宫颈癌Hela细胞增殖的影响。方法:Hela细胞分为实验组和对照组，实验组细胞加入不同浓度的黄芩茎叶总黄酮(0.04、0.06、0.08、0.1、0.14、0.16mg/ml)。四甲基偶氮唑盐法(MTT法)检测细胞的增殖情况，倒置显微镜观察Hela细胞形态的变化。结果:黄芩茎叶总黄酮能显著抑制Hela细胞增殖(P＜0.01);且在一定范围内随着药物浓度的增加抑制率逐渐升高。形态学观察显示，实验组Hela细胞数量明显减少，形态发生改变，悬浮的细胞增多。结论:黄芩茎叶总黄酮对Hela细胞增殖具有明显的抑制作用。

黄芩茎叶总黄酮;宫颈癌;Hela细胞;增殖

黄芩是我国一种传统中草药，始载于《神农草本经》，传统用根入药，但野生资源十分有限，近年来国内外研究学者开始对黄芩茎叶进行研究。黄芩茎叶总黄酮是从黄芩的茎叶中提取的有效成分。研究表明，黄芩茎叶总黄酮具有较强的抗氧化、抗炎、降压、降血脂、解热、镇痛、提高机体免疫力等功效，但对其抗肿瘤功效的研究很少[1-4]。国内有研究报道，黄酮类化合物可以抑制肿瘤细胞增殖，可能发展成为抗肿瘤药物[5]。本研究采用MTT法观察了不同浓度黄芩茎叶总黄酮对宫颈癌Hela细胞增殖的影响，以期为黄芩茎叶总黄酮用于治疗宫颈癌提供实验依据。

1 材料与方法

1.1 材料黄芩茎叶总黄酮:由承德医学院中药研究所提供(含量98%);宫颈癌Hela细胞株:购自上海细胞库。

1.2 仪器和试剂CO2孵育箱:德国Heraeus公司;净化工作台:上海新苗医疗器械制造有限公司;Multiskan MK3酶联仪:芬兰Thermo公司;显微镜及摄像装置:日本Olympus公司;6孔、96孔细胞培养板:无锡Biousing生物科技有限公司;DMEM培养基:美国GIBCO公司;MTT及胰酶:美国Sigma公司;二甲基亚砜(DMSO):天津市标准科技有限公司;无支原体胎牛血清:杭州四季青生物工程材料有限公司。

1.3 方法

1.3.1 细胞培养:宫颈癌Hela细胞贴壁生长于DMEM完全培养基中(含10%胎牛血清，青霉素和链霉素各100U/ml)，置于37℃、饱和湿度、5% CO2培养箱中培养。细胞分为实验组和对照组:实验组细胞加入用DMEM配制的不同浓度的黄芩茎叶总黄酮，终浓度分别为0.04mg/ml、0.06mg/ ml、0.08mg/ml、0.1mg/ml、0.14mg /ml、0.16mg/ml，每组设6个平行孔;对照组细胞只加培养液。

1.3.2 MTT法检测Hela细胞的增殖情况:取对数生长期Hela细胞，用胰酶消化后接种于96孔培养板，每孔加入细胞5×103个，培养液200μl。常规培养，细胞贴壁后加药。加药培养24h后，每孔加入MTT(5mg/ml)溶液20μl，继续培养4h后终止培养，小心吸去孔内培养液。每孔加入150μl二甲基亚砜，低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联检测仪上测定490nm处各孔的吸光值(OD值)，并按照下列公式计算各组细胞的生长抑制率，其中加药组细胞的OD值为同一浓度处理的不同样品的平均值。

1.3.3 形态学观察:取对数生长期的Hela细胞接种于6孔细胞培养板，细胞贴壁后，实验组加入黄芩茎叶总黄酮(终浓度为0.1mg/ml)，对照组不加药物，加相应体积的培养基，培养24h后在倒置显微镜下观察Hela细胞形态的变化。

1.4 统计处理采用SPSS 15.0统计软件进行统计分析，计量资料以(±s)表示，多个样本的比较采用单因素方差分析(LSD法)，两两比较采用q检验，检验水准α=0.05。

2 结果

2.1 黄芩茎叶总黄酮对Hela细胞生长的抑制作用不同浓度的黄芩茎叶总黄酮处理后，Hela细胞的增殖被明显抑制，黄芩茎叶总黄酮各剂量组Hela细胞的抑制率均明显高于对照组(P＜0.01)。随着黄芩茎叶总黄酮剂量的增加，Hela细胞的抑制率逐渐升高(P＜0.01，P＜0.05);但黄芩茎叶总黄酮0.1mg/ml、0.14mg/ml、0.16mg/ml组Hela细胞的抑制率比较，差异无统计学意义(P＞0.05)。见附表。

附表 MTT法检测黄芩茎叶总黄酮对Hela细胞增殖的影响(±s，n=6)

附表 MTT法检测黄芩茎叶总黄酮对Hela细胞增殖的影响(±s，n=6)

与对照组比较:aP＜0.01;与0.04mg/ml实验组比较:bP＜0.01;与0.06mg/ml实验组比较:cP＜0.01;与0.08mg/ml实验组比较:dP＜0.05，eP＜0.01

组别 药物浓度(mg/ml) OD值 抑制率(%)对照组 0 1.0347±0.02641 --0.04 0.8267±0.04174 20.02±5.25a0.06 0.6845±0.02365 33.78±3.49a0.08 0.3122±0.04806 69.83±4.63abc实验组 0.1 0.2462±0.02915 76.20±2.88abcd0.14 0.2177±0.03213 78.94±3.28abce0.16 0.2078±0.03870 79.96±3.36abce

2.2 形态学观察对照组宫颈癌Hela细胞呈多角形，核圆，细胞边缘清楚，背景清晰;实验组Hela细胞数量明显减少，形态发生明显变化，呈圆形或长条形，悬浮的细胞增多。

3 讨论

本研究发现，一定浓度的黄芩茎叶总黄酮可明显抑制Hela细胞的生长繁殖，且在一定范围内随着给药剂量的增加，抑制作用逐渐增强。黄芩茎叶总黄酮抑制Hela细胞增殖的机制尚不明确，还需进一步研究。

目前，对黄芩茎叶总黄酮功效的研究主要集中在保护心肌缺血/再灌注损伤、对心血管及其功能的作用、调血脂作用、神经保护作用、保护肝组织损伤、解热镇痛、抗炎作用、抗病毒作用、对免疫系统的影响等方面，对其抗肿瘤功效的研究较少。但有研究表明，黄芩茎叶总黄酮具有抑制肿瘤转移、侵袭等作用。如杨鹤松的研究发现[6]，黄芩茎叶总黄酮及野黄芩苷对体外培养的小鼠肺腺癌LA795细胞系有明显的抑制作用;刘金霞等[7]应用W256引起的大鼠骨组织吸收和溶解动物模型，发现黄芩茎叶总黄酮能抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移，作用机制可能是双向调节免疫功能。本研究以宫颈癌Hela细胞作为研究对象，证实黄芩茎叶总黄酮能够抑制肿瘤细胞的增殖，为将黄芩茎叶总黄酮开发成为抗肿瘤药物提供了实验依据。

宫颈癌是最常见的女性生殖器官肿瘤，在女性恶性肿瘤中发病率仅次于乳腺癌，位居第二位。目前，宫颈癌的首选疗法仍是手术和放疗[1]。但放疗的不良反应较大，部分患者难以坚持。本研究初步表明一定浓度的黄芩茎叶总黄酮对Hela细胞的生长具有明显的抑制作用，可为黄芩茎叶总黄酮在宫颈癌治疗中的应用提供一定的实验依据。

[1]尤翠兰，苏佩清，周晓霞.黄芩茎叶总黄酮调血脂作用及其机制的研究[J].中国中药杂志，2005，33(9):1064-1066.

[2]周晓霞，李素婷，周晓慧，等.黄芩茎叶总黄酮抗炎作用的实验研究[J].中国中医药信息杂志，2000，7(4):27-28.

[3]李素婷，杨鹤梅，曹凯.黄芩茎叶总黄酮对小鼠组织GSHPX活性和LPO含量的影响[J].承德医学院学报，1999，16(4):306.

[4]谭秦莉，刘冬，李玉宝，等.总黄酮化合物药理作用研究进展[J].安徽中医学院学报，2009，28(3):62-64.

[5]段迎春.宫颈癌的治疗进展[J].国外医学妇产科学分册，2007，34(2):137-139.

[6]杨鹤松.黄芩茎叶总黄酮对LA795小鼠肺腺癌的抑制作用[J].承德医学院学报，2008，25(4):139.

[7]刘金霞，王立平，徐小惠.黄琴茎叶总黄酮对W256瘤细胞引起大鼠骨侵袭抑制作用[J].中国药理学通报，2005，21(1):125-126.

EFFECTS OF SCUTELLARIA BAICALENSIS STEM-LEAF TOTAL FLAVONOID ON PROLIFERATION OF HELA CELLS

GUO Hui-fang, XU Qian
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the effects of Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid on proliferation of cervical cancer cell line Hela cells.Methods:Hela cells were incubated with different concentration of Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid (0.04,0.06,0.08,0.1,0.14,0.16mg/ml). MTT assay was used to detect the proliferation of Hela cells, and inverted microscope to observe the morphology of Hela cells.Results:Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid could inhibit proliferation of Hela cells obviously (P＜0.01); Moreover, the inhibitory rate gradually increased with increasing of Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid concentration in a certain range. Observed under inverted microscope, the number of Hela cells reduced and morphology of Hela cells changed obviously, and suspension cells increased. Conclusions: Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid has obviously inhibitory effects on proliferation of Hela cells.

Scutellaria baicalensis stem-leaf total fl avonoid; Cervical cancer; Hela cells; Proliferation

R285

A

1004-6879(2013)04-0275-03

2012-12-18)