张宏旭，李稳霞，王助新，胡大为△(.承德医学院，河北承德 067000;.承德医学院附属医院肿瘤外二科)

VEGF和LN在大肠癌中的表达及与大肠癌预后的关系

张宏旭1，李稳霞2，王助新2，胡大为2△
(1.承德医学院，河北承德 067000;2.承德医学院附属医院肿瘤外二科)

目的:探讨大肠癌血管内皮生长因子(VEGF)、层黏连蛋白(LN)表达及与大肠癌预后的关系。方法:应用SP免疫组化法检测正常大肠黏膜、大肠腺瘤和大肠癌组织VEGF和LN的表达，并分析二者与大肠癌病理特征和预后的关系。结果:大肠癌VEGF和LN的表达均明显高于大肠腺瘤和正常大肠黏膜(P＜0.01，P＜0.05)。大肠癌VEGF和LN的表达均与淋巴结转移、分化程度、Duke’s分期和术后生存期有关(P＜0.01，P＜0.05)。结论:联合检测VEGF和LN可作为判断大肠癌浸润转移和评估预后的参考指标。

VEGF;LN;大肠癌;免疫组化;预后

肿瘤的浸润和转移是大肠癌患者的主要死亡原因，是多基因相互作用的结果[1]。肿瘤的血管生成对肿瘤的发生、发展具有重要作用。血管内皮生长因子(VEGF)属血小板源性生长因子超家族，通过VEGF受体介导的信号转导通路，促进内皮细胞的增殖、迁移，阻止内皮细胞凋亡和管腔网状结构退化，增加血管渗透性，从而在肿瘤血管生成和肿瘤生长中起重要作用[2]。层黏连蛋白(LN)是基底膜的主要组分，LN表达越低，基底膜的缺损程度越高，因此以LN的表达水平代表基底膜的缺损程度。LN可介导癌细胞与基底膜的黏着，在癌细胞的浸润和转移方面起重要作用[3]。本研究旨在观察大肠癌VEGF、LN的表达与大肠癌发生、浸润、转移及预后的关系，为判断大肠癌的预后提供依据。

1 资料与方法

1.1 研究对象承德医学院附属医院肿瘤外二科2007年5月-2010年10月收治的68例大肠癌患者手术切除的大肠癌组织，所有患者术前均未经过放疗、化疗及免疫治疗。同时选取承德医学院附属医院内镜室留取的26例大肠腺瘤组织，以及距上述大肠癌组织5-10cm的正常大肠黏膜组织18例。所有切片均经组织病理学证实。所有标本均用10%福尔马林固定，常规石蜡包埋，连续切片，切片厚度4μm。

1.2 S-P免疫组化染色采用S-P免疫组化法观察VEGF和LN的表达，即用型鼠抗人VEGF单克隆抗体、鼠抗人LN单克隆抗体、SP试剂盒和DAB显色试剂盒均购自美国Sigma公司。实验按照试剂盒说明进行，DAB显色，苏木素复染细胞核，染色时设立阴性对照(以PBS液代替一抗)和阳性对照(已知阳性切片)。

1.3 免疫组化染色结果判定

1.3.1 VEGF:以细胞浆和细胞膜出现棕黄色颗粒为VEGF阳性反应。在400倍光镜下随机选取5个视野，每个视野计数100个细胞，计算阳性细胞百分率:＜10%为阴性(-)，10%-30%为弱阳性(+)，30%-50%为中等阳性(++)，＞50%为强阳性(+)。

1.3.2 LN:以基底膜染成棕黄色为阳性信号，以基底膜的缺损程度代表LN的表达程度。LN染色结果按基底膜缺损程度分为:呈碎片状或完全缺失为(-)，明显间断、区域缺失为(+)，呈不连续、不均匀的线状结构为(++)，基底膜呈连续线状结构为(+++)。以(-)和(+)为基底膜明显缺损，即LN低表达;以(++)和(+++)代表基底膜的非明显缺损，即LN高表达。

1.4 临床随访对68例大肠癌术后患者通过电话、书信及下乡调查等方式进行随访，随访68例，随访率100%，生存期＜5年36例、＞5年32例。

1.5 统计分析应用SPSS 13.0统计软件进行统计分析，行卡方检验，P＜0.05为差异有统计学意义。

2 结果

2.1 不同大肠组织VEGF和LN的表达情况大肠癌VEGF和LN的阳性表达率明显高于正常大肠黏膜和大肠腺瘤(P＜0.01，P＜0.05);大肠腺瘤VEGF和LN的阳性表达率明显高于正常大肠黏膜(P＜0.01，P＜0.05)。见表1。

表1 不同大肠组织VEGF和LN的表达情况

2.2 VEGF和LN与大肠癌病理特征的关系大肠癌VEGF和LN的表达均与淋巴结转移、分化程度、Duke’s分期和术后生存期有关(P＜0.01，P＜0.05)。见表2。

表2 VEGF和LN表达与大肠癌病理特征的关系

3 讨论

VEGF属血小板源性生长因子超家族，是肿瘤血管生成的重要因子。肿瘤血管的生成与大肠癌的发生、发展关系密切。LN是一种糖蛋白，是基底膜的主要成分，基底膜是肿瘤发生侵袭转移的天然屏障[4]。LN首先介导肿瘤细胞与基底膜黏附，然后肿瘤细胞释放一系列蛋白水解酶，破坏基底膜的完整性，从而实现肿瘤的浸润和转移[5]。本研究发现，大肠癌组织VEGF、LN的表达明显高于大肠腺瘤和正常大肠黏膜，并且与大肠癌的淋巴结转移、分化程度、Duke’s分期有关，这与胡大为等的报道一致[6]。本研究结果显示，LN低表达的大肠癌患者更易发生淋巴结转移，且其分化程度较LN高表达的患者低、Duke’s分期较LN高表达的患者高，原因可能是低分化的大肠癌细胞更易破坏基底膜，从而使肿瘤细胞更易通过肿瘤天然屏障—基底膜转移至淋巴结以及增加局部浸润的深度，进而导致Duke’s分期升高。因此认为，VEGF和LN可作为反映大肠癌生物学行为的重要指标。

大肠癌的主要死因是术后复发和转移。本研究通过随访发现，生存期＜5年的大肠癌患者VEGF、LN阳性表达率均明显高于生存期≤5年的患者，说明VEGF及LN高表达患者更易发生术后转移和复发。因此，联合检测VEGF和LN可作为评估大肠癌患者预后的指标。

[1]张汝一，甄运寰，霍新凯，等.hTERT CD44v6在大肠癌中的表达及意义[J].中国肿瘤临床，2009，37(12):681-684.

[2]Rmali KA, Puntis MC, Jiang WG. Tumour-associated angiogenesis in human colorectal cancer[J].Colorectal Cis, 2007, 9(1):3-14.

[3]李稳霞，胡大为，敖亚洲，等.LN、CD44v6在大肠癌组织中的表达及临床意义[J].承德医学院学报，2009，26(2):125-127.

[4]Engbring JA, Kleinman KH.The basement membrane matrix in malignancy[J].Pathol, 2003, 200(4): 465-470.

[5]Wu XZ, Chen D, Xie GR. Extracellular matrix remodeling in epatocellular carcinoma: Effects of soil on seed? [J]. Medical Hypotheses, 2006, 66(6): 1115-1120.

[6]胡大为，李稳霞，王助新，等.VEGF、MVD和LN与大肠癌微转移的关系[J].肿瘤防治研究，2012，39(4):432-434.

VEGF AND LN EXPRESSION IN COLORECTAL CANCER AND THEIR RELATIONSHIPS WITH COLORECTAL CANCER PROGNOSIS

ZHANG Hong-xu, LI Wen-xia, WANG Zhu-xin, et al
(Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To investigate the vascular endothelial growth factor (VEGF) and laminin (LN) expression in colorectal cancer and their relationships with colorectal cancer prognosis.Methods:SP immunohistochemical staining was used to detect the expression of VEGF and LN in normal colorectal mucosa, colorectal adenoma and colorectal cancer.Results:The expression of VEGF and LN in colorectal cancer was all obviously higher than normal colorectal mucosa and colorectal adenoma (P＜0.01, P＜0.05). The expression of VEGF and LN in colorectal cancer all was associated with lymphatic metastasis, differentiated degree and Duke’s stage (P＜0.01, P＜0.05).Conclusions:Joint detection of VEGF and LN can be acted as reference index for judging colorectal cancer metastasis and evaluating prognosis.

Vascular endothelial growth factor; Laminin; Colorectal cancer; Prognosis

R735.3

A

1004-6879(2013)04-0281-03

2012-12-05)

△ 通讯作者