刘素丽，赵胜男，李守拙(承德医学院中药研究所，河北承德 067000)

相同产地黄芩HPLC指纹图谱研究

刘素丽，赵胜男，李守拙△
(承德医学院中药研究所，河北承德 067000)

目的:建立相同产地黄芩药材的HPLC指纹图谱，以探讨相同产地黄芩药材的个体差异。方法:采用HPLC法测定20个采自内蒙古赤峰的黄芩样品的HPLC指纹图谱，色谱条件:Agilent TC-C18柱(4.6mm×250mm，5µm)，乙腈与0.1%冰醋酸溶液进行梯度洗脱，检测波长276nm，流速1ml/min，柱温25℃。运用中药色谱指纹图谱相似度评价系统分析各个样品的相似度。结果:20个黄芩药材样品的HPLC指纹图谱主要有6个共有峰，样品相似度均达到0.9以上，但共有峰相对面积有一定的差异。结论:相同产地黄芩HPLC指纹图谱分析方法可靠，可为以后研究不同产地黄芩药材HPLC指纹图谱奠定基础。

黄芩;高效液相色谱;指纹图谱

1 材料与方法

1.1 仪器Agilent 1200Series高效液相色谱仪，美国安捷伦公司;DAD检测器，Agilent Chemstation System色谱工作站;梅特勒-托利多AG245分析天平，瑞士梅特勒-托利多公司。

1.2 实验材料20个药材样品，均采自内蒙古赤峰，由中国科学院植物研究所系统与进化植物学国家重点实验室周世良研究员鉴定为正品黄芩。对照品:黄芩苷(批号:715-9506)、黄芩素(批号:111595-200604)、汉黄芩素(批号:111514-200403)，购自中国药品生物制品检定所;汉黄芩苷(批号:20090319)、千层纸素A(批号:20091124)、白杨素(批号:090518)，购自上海顺勃生物工程技术有限公司。试剂:甲醇、乙腈为色谱纯，冰醋酸、乙酸乙酯等试剂为分析纯。

1.3 色谱条件色谱柱:Agilent TC-C18柱(4.6mm× 250mm，5µm);流动相:0.1%冰醋酸水溶液(A)-乙腈(B)是;线性梯度洗脱:0-5min(79%A-21%B)，5-12min (78%A-22%B)，12-30min(70%A-30%B)，30-60min(60%A-40%B);柱温:25℃，流速:1.0ml/min，检测波长:276nm，进样量:10µl。

1.4 溶液的制备

1.4.1 供试品溶液的制备:精密称取药材粉末0.25g，加入25ml溶剂(水:乙醇:乙酸乙酯:冰醋酸=50:49:5:1)，置于60ml圆底烧瓶中，回流1.5h，过0.45µm微孔滤膜，即得。

1.4.2 对照品溶液的制备:精密称取黄芩苷、汉黄芩苷、黄芩素、千层纸素A、汉黄芩素、白杨素对照品适量，分别用甲醇配制成浓度为35.0、22.6、19.0、20.2、20.2、38.8、28.2µg/ml的溶液。

1.5 方法学考察

1.5.1 精密度试验:取黄芩苷对照溶液10µl，连续进样6次，记录色谱图。测得黄芩苷的保留时间和峰面积的RSD均＜2.0%，表明仪器精密度良好，分析结果稳定、可信。

1.5.2 重现性试验:精密称取同一个黄芩样品粉末6份，按“1.4.1”的方法制备供试液，记录指纹图谱。测得各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD＜3%，符合色谱指纹图谱研究要求。

1.5.3 稳定性试验:取同一供试液，每2h进样分析，至48h为止，测得各共有峰相对峰面积和相对保留时间的RSD＜1.5%，表明供试液在48h内稳定。

1.6 HPLC指纹图谱的建立

1.6.1 指纹图谱的建立:将20个相同产地黄芩药材按“1.4.1”的方法制备供试品溶液，按照1.3的色谱条件测定，记录色谱图。将药材指纹图谱导入中药色谱指纹图谱相似度评价系统软件2004A，设定S1为参照图谱，将谱峰自动匹配，采用平均法生成对照谱，得到指纹图谱色谱匹配图，见附图。

附图 20个相同产地黄芩匹配结果

1.6.2 共有峰的确定:将所得指纹图谱进行比较分析，选定吸收较强、峰形较好的色谱峰为共有峰，得到6个共有峰。通过与对照品比较，6个共有峰分别为1号黄芩苷、2号汉黄芩苷、3号黄芩素、4号汉黄芩素、5号白杨素、6号千层纸素A。其中黄芩苷色谱峰含量较高，分离度较好，因此将黄芩苷色谱峰作为参照峰(S峰)，计算各个共有峰与参照峰的峰面积比值。

2 结果

2.1 黄芩指纹图谱的分析与评价由附图可知，20个黄芩样品的HPLC指纹图谱基本一致。由附表可见，各个峰的相对峰面积有差异性。

附表 黄芩指纹图谱共有峰相对峰面积比较

2.2 黄芩指纹图谱相似度评价采用HPLC对20个相同产地黄芩样品进行处理分析，通过与对照指纹图谱比较，得到20个黄芩样品HPLC指纹图谱的相似度，1-20号样品的相似度分别为0.997、0.984、0.989、0.960、0.985、0.996、0.993、0.997、0.998、0.991、0.933、0.993、0.988、0.992、0.993、0.999、0.996、0.981、0.994、0.997。结果表明，20个黄芩药材与对照图谱的相似度均在0.9以上，即相似度较高。

3 讨论

本研究采用HPLC指纹图谱[2]进行分析，一方面通过图谱的直观比较，能够反映各个共有峰的有无及大致比例关系;另一方面通过计算相对峰面积，判断同产地黄芩质量是否一致。本研究的方法能综合、宏观的评价黄芩质量。HPLC指纹图谱与现行的单一指标成分相比，所包含的信息是综合的、多层次的，因此更为科学和合理。

黄芩指纹图谱相似度评价结果虽然显示药材的相似度都在0.9以上，但各个药材的相似度不尽相同，原因可能是黄芩在生长过程中受土壤、水分、阳光等多种不确定因素的影响所致。各峰相对峰面积的差异性表明，相同产地黄芩药材的内在质量存在差异性。因此，在研究不同产地黄芩质量的过程中，建议考虑同一产地样本的个体差异对结果的影响。

通过对相同产地黄芩的指纹图谱进行研究，说明相同产地黄芩样品之间存在个体差异，为以后研究不同产地的黄芩奠定了实验基础。

[1]肖蓉，袁志芳，王春英，等.不同产地黄芩药材HPLC指纹图谱的研究[J].中草药，2005，36(5):743-747.

[2]Liu G, Ma J, Chen Y, et al. Investigation of fl avonoid pro fi le of Scutellaria bacalensis Georgi by high performance liquid chromatography with diode array detection and electrospray ion trap mass spectrometry [J]. J Chromatogr A, 2009, 1216(23): 4809-4814.

STUDY ON THE FINGERPRINTS OF SCUTELLARIA BAICALENSIS FROM SAME PRODUCTION PLACES

LIU Su-li, ZHAO Sheng-nan, LI Shou-zhuo
(Institute of Chinese Mateia Medica, Chengde Medical College, Hebei Chengde 067000, China)

Objective:To study the difference of Scutellaria baicalensis from same production places by establishing HPLC fi ngerprints of Scutellaria baicalensis.Methods:HPLC fi ngerprints of 20 Scutellaria baicalensis samples from Neimenggu Chifeng were analyzed by HPLC. The chromatographic condition: Agilent TC–C18Column (4.6mm×250mm, 5μm), mobile phase was acetonitrile and 0.1% glacial acetic acid in gradient elution program, detecting wave length 276nm, fl ow rate 1.0 ml/min, and column temperature 25℃. The similarity of each sample was analyzed by chromatographic fi ngerprint similarity evaluation system.Results:20 Scutellaria baicalensis samples had 6 common peaks. The similarity of 20 samples were all higher than 0.9, but there had some differences between the relative area of the common peaks.Conclusions:HPLC fi ngerprints of Scutellaria baicalensis from same production places will provide a reference standard for the study of Scutellaria baicalensis from different production places.

Scutellaria baicalensis Georgi; HPLC; Fingerprint黄芩为唇形科植物(Scutellaria baicalensis Georgi)，以根入药，有清热燥湿、凉血安胎、解毒的功效，产于河北承德、辽宁、陕西、山东、内蒙古、黑龙江等地。黄芩含有多种化学成分，其主要成分为黄酮类化合物。近年来，越来越多的学者开始研究不同产地黄芩质量的差异，但忽略了同产地、同批黄芩药材间的差异[1]。由于受阳光、土壤、水分等的影响，相同产区、同批药材的化学成分含量不尽相同。本研究采用反相高效液相色谱(RP-HPLC)法，对20个同产地黄芩样品进行了HPLC指纹图谱研究，以期为以后研究不同产地黄芩药材的HPLC指纹图谱奠定基础。

R284.1

A

1004-6879(2013)04-0283-03

2012-12-21)

△ 通讯作者