方 莉，龙思琪，许 媛，唐 中，赵维皎，黄义山，廖 涛△

（1.川北医学院附属医院检验科，四川南充637000；2.川北医学院医学检验系，四川南充637000）

由于抗菌药物的广泛使用，近年来耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）的检出率不断增高，MRSA不仅只对甲氧西林耐药，对β-内酰胺类、氨基糖苷类、大环内酯类等多种抗菌药物均耐药，表现出多重耐药性［1-2］。快速、准确的检出 MRSA，对临床选用合适的抗菌药物具有重要的意义［3］，也有利于控制MRSA的流行传播。本文旨在使用实时荧光PCR法检测临床标本中的mecA基因和nuc基因，为临床检测MRSA提供了一种快速、有效的方法，有效减少MRSA的医院感染。

1 材料与方法

1.1 材料

1.1.1 标本来源 收集2012年1～6月川北医学院附属医院新生儿科、皮肤科、烧伤科、脑外科、骨科、ICU等科室的45例患者的痰液和脓液标本，保存在-40℃冰箱中备用。其中40份临床标本被检验科微生物室分离鉴定为MRSA，2份标本被鉴定为甲氧西林敏感的金黄色葡萄球菌（MSSA），3份标本被鉴定为耐甲氧西林的表皮葡萄球菌。

1.1.2 菌株来源 40株检验科微生物室分离鉴定为 MRSA的菌株，来源于上述临床标本的分离培养，并经血浆凝固酶实验及vitek2-compact细菌快速培养和药敏检测系统鉴定为MRSA，菌株保存于-40℃冰箱中。

1.1.3 主要试剂及仪器 实时荧光定量PCR仪（ROCHE Lightcycler480Ⅱ）、vitek2-compact细菌快速培养和药敏检测系统（法国生物梅里埃）、MRSA基因检测试剂盒（上海之江生物）、MRSA鉴定培养基（法国生物梅里埃）。

1.2 方法

1.2.1 细菌培养鉴定药敏实验 将40份痰液和脓液标本按微生物室标准化操作规程进行处理，分离培养后对于形似葡萄球菌的菌落作革兰染色，触酶实验，血浆凝固酶实验，然后利用GP鉴定卡及AST-GP药敏卡作细菌的鉴定及药敏实验。……