张 婷，谢 渊，李 毅，单可人，官志忠

（贵阳医学院分子生物学重点实验室 550004）

亚甲基四氢叶酸还原酶（methy lenete trahydr of olate reductase，MTHFR）蛋白普遍存在于人、动物及原核生物中，其生化功能是催化5.1 0-亚甲基四氢叶酸到5-甲基四氢叶酸的还原反应。MTHFR酶活性的改变会导致5-甲基四氢叶酸的生成障碍，从而导致同型半胱氨酸（homocysteine，Hcy）复甲基化障碍，使得血浆Hcy浓度升高［1-2］，从而导致多种疾病的发生。目前研究较为广泛的是该酶基因的677C／T和1298A／C多态位点，已有研究表明其在不同国家、同一国家不同地区、不同民族或种族中的分布有显著差异性［3-5］。布依族、侗族、苗族是贵州省人口较多的少数民族，本研究所选标本采自封闭的自然群体。通过了解贵州布依族、侗族及苗族人群中MTHFR基因677C／T和1298A／C的遗传多态性，获取相关群体遗传数据。

1 资料与方法

1.1 一般资料 根据知情同意的原则，随机选取贵州世居布依族、侗族、苗族隔离自然人群，样本总量597例，其中布依族201例，男100例，平均（46.5±14.1）岁，女101例，平均（47.9±14.0）岁；侗族198例，男106例，平均（46.5±18.2）岁，女92例，平均（45.8±17.2）岁；苗族198例，男112例，平均（48.3±12.9）岁，女86例，平均（45.0±10.3）岁。研究对象彼此间无直接血缘关系，采集受试对象外周静脉血血样，EDTA-K2抗凝后，-20℃保存。

1.2 方法

1.2.1 DNA提取 采用常规酚-氯仿抽提法从全血中提取DNA，并将样品DNA标化为20ng／μL作为模板，-20℃存放备用。

1.2.2 TaqMan-MGB探针基因分型 采用ABI公司的Taq-Man®SNP Genotyping Assays对 MTHFR 677C／T，1298A／C）进行基因分型。反应体系10L，包含5LTaqMan®Universal PCR Master Mix，0.25LTaqMan Genotyping Assay，1 μL DNA（20ng／μL），加双蒸水至10μL。反应条件为60℃30s；95℃10min；92℃15s，60℃60s，共40个循环；60℃30 s。所扩增的目的基因片段由于SNPs位点的碱基不同，标记呈不同的荧光，利用荧光发光特点，通过Applied Biosystems StepOneTM基因分析仪检测，StepOneTM软件分析基因分型结果。……