冯 旭 ，禹宝庆，刘 莉 ，李承 ，陈安民

（1.上海市浦东医院复旦大学附属浦东医院骨科、麻醉科，上海 201399；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科，湖北 武汉 430030）

胶原酶优化消化法对退变椎间盘纤维环细胞分离培养的作用

冯 旭1，禹宝庆1，刘 莉1，李承1，陈安民2

（1.上海市浦东医院复旦大学附属浦东医院骨科、麻醉科，上海 201399；2.华中科技大学同济医学院附属同济医院矫形外科，湖北 武汉 430030）

目的 通过观察不同浓度Ⅰ、Ⅱ型胶原酶对退变椎间盘纤维环组织消化效果，探讨适合于纤维环细胞分离培养的优化消化法。方法 收集16例退变椎间盘纤维环组织，Ⅰ、Ⅱ型胶原酶单独消化并在0.1%，0.05%，0.01%浓度下联合消化。消化4、8、16、24 h时倒置显微镜下计算纤维环细胞数，台盼蓝染色检查其活力，并观察其生长情况。结果 Ⅰ、Ⅱ型胶原酶联合消化细胞数多于单独消化细胞数。联合消化4、8 h时，细胞数随胶原酶消化浓度增加而增多，16、24 h时极低浓度组纤维环细胞数逐渐增多，细胞活力维持在较高水平。结论 极低浓度Ⅰ、Ⅱ型胶原酶优化消化法能节省酶量，对细胞损伤小，更适合纤维环细胞分离培养。

胶原酶；优化消化法；纤维环细胞；分离培养

酶消化法是分离椎间盘纤维环组织细胞的常 用方法,有报道采用链酶蛋白酶消化[1]，但成本偏高。实验中常用胰蛋白酶和胶原酶分离消化椎间盘组织。胶原酶（Collaganase）属于基质金属蛋白酶家族，在一定的PH及温度下能溶解椎间盘纤维环组织。但在何种优化条件下充分发挥胶原酶的活性，对消化分离的纤维环细胞损伤更小，值得进一步探讨。……