周 莉 于津浦 李 慧 于文文 任宝柱 曹 水 任秀宝

在一些晚期肿瘤和标准治疗失败的恶性肿瘤中，人们普遍认识到生物治疗包括免疫细胞治疗和肿瘤疫苗能够起到明确的抗肿瘤效果。近期的研究表明，相较于传统的治疗，CIK细胞有更强的抗肿瘤作用。CIK细胞在多项研究中均被发现有NK细胞功能［1］，并且在治疗多种实体肿瘤中取得了可靠的疗效［2］。这些优点表现在细胞增殖率、非MHC限定细胞毒作用、增强药物抵抗肿瘤细胞的药物敏感性［3-4］。除此之外，研究显示，健康供者和肿瘤患者中得到的CIK细胞有相似的增殖作用，在动物实验和患者中均取得了良好的耐受性。

CIK细胞是一群新型的免疫活性细胞群体，是将人外周血单个核细胞在体外用多种细胞因子（抗CD3抗体、IL-2、IFN-γ等）诱导扩增一段时间后获得的一群异质性细胞，其中CD3+CD56+细胞在对肿瘤细胞的杀伤活性中发挥着至关重要的作用［5-6］。IFN-γ又是在CIK细胞发挥细胞毒作用和介导Th1类细胞免疫反应中发挥关键作用的细胞因子［6-8］。此外，CD4+T细胞又通过产生有利于Th1极化的细胞因子和扭转Fas抵抗来调节CIK细胞的抗肿瘤作用［9-10］。然而，在大规模的细胞体外培养体系中，T细胞凋亡仍然是提高CIK细胞增殖能力的瓶颈所在。研究显示，IFN-γ也是引起T淋巴细胞激活诱导性细胞死亡（ACID）的关键因子，这使得体外CIK细胞的大量扩增受到限制［11-13］。然而，CH-296被发现能够刺激T细胞的增殖。本研究旨在探讨CH-296和IFN-γ是否可以相互促进，从而突破CIK细胞体外大量扩增的瓶颈。

1 材料与方法

1.1 临床资料

收集天津医科大学附属肿瘤医院2007年1月至2009年12月间20例实体肿瘤患者，男性16例，女性4例，年龄21～28岁。其中肺癌9例，胃癌3例，肾癌2例，胆管癌2例，非霍奇金淋巴瘤1例，甲状腺癌1例，前列腺癌1例和肉瘤1例。这些患者中，17例为Ⅳ期，1例I期和2例Ⅱ期（表1）。入组前至少其他治疗包括化疗、放疗和手术结束1个月。RN-CIK治疗过程中无传统治疗和辅助性治疗。每位患者均签署了知情同意书。KPS评分和CT检查用来评估临床反应。

表1 20位接受治疗患者数据Table1 Clinical data of 20 patients enrolled in the RN-CIK treatment

1.2 RN-CIKs增殖

白细胞分离法，采集所有患者外周静脉血，富集血单个核细胞量为（1.5×108/flask），转入含有1 000 U/mL重组人IFN-γ和300 U/mL IL-2 GT-T551无血清培养基中。此培养基同时包被了抗CD3抗体（5 μg/mL）和CH-296（25 μg/mL）。第4天细胞转入培养袋中继续培养。包含IL-2和IFN-γ GT-T551无血清培养基添加2次。经过14d的培养，CH-296和多种细胞因子诱导的杀伤细胞（RN-CIKs）成熟，PBS洗涤2次，经静脉回输患者体内，细胞总量＞3×1010。5例患者的细胞培养未加入IFN-γ补充剂，作为评估的对照组。细胞的数量和活力通过台盼蓝染色法检验。细胞表型测定采用流式细胞仪，此种方法培养的CIK细胞在增殖、抗代谢、抗肿瘤细胞毒性、抗原分泌方面的能力均较传统CIK细胞有所提高［14］。

1.3 统计学方法

统计学分析使用SPSS 13.0软件。计量资料分析采用以±s表示。各组计量资料的比较使用one-way ANOVA统计法分析。两两比较用LSD检验。P＜0.05为差异具有统计学意义。

2 结果

RN-CIKs临床中是安全有效的。全部20例患者接受了3个周期的RN-CIKs细胞静脉输注。每周期细胞回输总量为（5.19±0.68）×1010并分4天回输患者，平均增殖58.34倍。除2例患者在回输过程中出现发热，无严重不良事件发生。在RN-CIKs治疗后，KPS评分和CT检查用来评估临床反应。大部分患者有临床症状的缓解和生理功能的提高。KPS评分平均提高了（13±8.6）分。随访1年，20例患者病情评价，稳定（SD）9～25个月（图1A）。8例患者病情进展，其中7例患者死亡（表1）。总体临床反应率PR和SD为65%（13/20），其中1例患者在病情进展5个月后出现部分缓解（PR）（图1B）。1年生存率为65%（13/20），Ⅳ期患者为58.82%（10/17）。OS为（16.95±6.10）个月。

图1 接受RN-CIKs治疗后CT片的比较Figure1 Patients with shrunk tumor after RN-CIK treatment

3 讨论

手术、化疗和放射治疗在原发肿瘤患者的治疗中占据着主要地位。但是，当肿瘤患者出现转移和复发时，化疗就成为了一线治疗方案。然而，由于严重的细胞毒性反应和肿瘤细胞对细胞毒药物的耐药情况，使得转移或者复发的肿瘤患者的治疗遭遇到很大障碍。免疫效应性细胞，尤其是CIK细胞为晚期化疗抵抗患者的治疗提供了更进一步的治疗方法［15］。既往研究显示，转移部位和临床分期对于CIK细胞的抗肿瘤细胞毒性作用和细胞的增殖能力无明显影响。然而，由于ACID作用的影响，体外CIK细胞的大量扩增受到限制，由此可能减弱过继性免疫细胞治疗的临床效果［9］。

为了证实RN-CIKs细胞体内抗肿瘤效益，本研究设计了Ⅰ期临床试验RN-CIK治疗实体肿瘤。全部20例患者接受了3个周期的RN-CIK细胞静脉输注治疗。80%的患者有临床症状的改善和生理功能的提升。在1年随访期结束时，12例患者病情稳定，8例患者病情进展。1年生存率为65%（13/20），Ⅳ期患者为58.82%（10/17）。OS为（16.95±6.10）个月。这些结果证明了RN-CIKs细胞临床治疗的安全性和有效性。

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