陈猛，郝林，史振铎，张辉，董洋，韩从辉

(1.东南大学医学院，江苏南京 210009;2.东南大学医学院附属徐州医院泌尿外科，江苏徐州 221009)

基因治疗膀胱癌是现在的研究热点，腺病毒是常用的载体之一。而超抗原靶向抗肿瘤模式为肿瘤治疗提供了一个新的方向，并显示出良好的应用前景。我们根据端粒酶高表达于人恶性肿瘤和缺氧诱导因子1α(hypoxia-inducible factor-1α，HIF-1α)在膀胱癌中表达上调的特点构建了携带超抗原金黄色葡萄球菌肠毒素A(staphylococcal enterotoxins A，SEA)基因的人端粒酶逆转录酶(hTERT)/HIF双调控溶瘤腺病毒PPE3-SEA。体外实验证实，PPE3-SEA对人膀胱肿瘤EJ细胞具有杀伤作用［1］。然而免疫治疗使得动物实验无法使用裸鼠模型，因此hTERT启动子和HIF启动子能否在鼠肿瘤细胞中与相应的转录因子结合使SEA表达成为动物实验的关键。Shieh等［2］实验表明，在小鼠膀胱癌MBT-2中hTERT启动子具有明显活性并能使其下游的胞嘧啶脱氨酶基因表达。本实验旨在观察PPE3-SEA能否感染小鼠膀胱癌MB49并表达SEA基因。

1 材料和方法

1.1 材料

腺病毒PPE3-SEA由实验组构建并保存，小鼠膀胱癌细胞MB49由天津泌尿外科研究所提供，RT-PCR试剂盒购自南京凯基公司，逆转录-聚合酶链反应引物合成于南京金斯瑞公司，SEA单克隆抗体购自Santa Cruz公司。

1.2 生物倒置显微镜下观察细胞感染腺病毒后形态学变化

取对数生长期MB49细胞胰酶消化、离心，分别计数5×103接种到96孔板，待细胞贴壁后分别加入0、5、10、40 MOI腺病毒感染细胞，每组8个复孔。分别于12、24、48 h在OLYMPUS生物倒置显微镜下观察细胞生长状态并拍照。

1.3 RT-PCR检测PPE3-SEA在MB49细胞内SEA的mRNA表达

根据GenBank已知的SEA基因序列用Primer 5软件设计引物，上游引物:5'-TAGCGAGAAAAGCGAA-3'，下游引物:5'-ATCCAACTCCTGAACAG-3'。……