姚远，李艳，赵鸿梅

(辽宁省人民医院消化内一科，辽宁沈阳 110016)

胃癌是消化道常见的恶性肿瘤之一，在国内不少地区的恶性肿瘤死亡统计中占首位或第2位［1］。肿瘤转移相关基因(MTA)是最新发现的与癌症进展相关的一个家族，MTA家族的成员包括3种不同的基因(MTA1、MTA2和 MTA3)和已经报道的6种亚型(MTA1、MTA1s、MTA1-ZG29p、MTA2、MTA3 和 MTA3L)［2］。MTA1是这个家族中首先被发现的，已经报道许多人类的肿瘤中MTA1高表达［3］，例如乳腺癌、卵巢癌、肺癌、胃肠系统癌症和结肠直肠癌［4-10］。本研究主要探讨胃癌细胞系以及胃癌临床标本中MTA1的表达情况，以及MTA1在胃癌细胞中的定位情况，为胃癌的治疗提供理论依据。

1 材料与方法

1.1 主要试剂

Protein marker购自GenScript公司;MTA1抗体购自Santa公司;HRP标记的羊抗鼠IgG购自北京中杉金桥生物技术有限公司;Alexa Fluor 488、DAPI购自Invitrogen公司，ECL发光试剂盒购自GE Healthcare公司;其他试剂均为国产分析纯。

1.2 细胞培养

GES1、BGC803、BGC823、SGC7901、MKN1、MKN45、N87、AGS胃癌细胞株均购自于中国科学院细胞库。细胞均用含有10%胎牛血清的培养基DMEM进行培养，培养至90%融合，进行细胞传代或用于实验。

1.3 蛋白提取

1.3.1 细胞蛋白提取 将细胞铺于6孔板中，培养至90%融合，弃掉培养基，用PBS清洗两遍，在细胞中加入60μl含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液，用橡皮刮刀将细胞缓慢刮下。收集所有液体到新的离心管中，冰上放置10 min，裂解细胞。13 000 g 4℃离心30 min，将上清转到新的离心管中，取上清5μl，选用G250考马斯亮蓝方法进行蛋白定量。

1.3.2 组织蛋白提取 用剪刀将组织剪成小块，冰上操作，快速研磨，根据组织块大小加入含有蛋白酶抑制剂的RIPA裂解液，使用细胞超声破碎仪200 W超声破碎5次。……