王秋艳，蓝袁洋，李海峰，张亚丽，黄黎锋

（杭州师范大学生物医药与健康中心，浙江 杭州 311121）

短小芽孢杆菌（Bacillus pumilus）糖基转移酶基因的克隆、序列分析及表达

王秋艳，蓝袁洋，李海峰，张亚丽，黄黎锋

（杭州师范大学生物医药与健康中心，浙江 杭州 311121）

为获得具有催化活性的糖基转移酶纯酶，本研究以短小芽孢杆菌基因组DNA为模板，利用简并PCR技术扩增到基因（GT-A）全长序列.该序列全长1 287bp、编码423个氨基酸，分子量约为49.2KD.经序列分析，该基因属于糖基转移酶基因.根据GT-A 基因开放阅读框序列设计引物，构建了原核表达重组质粒GTA-pet28a，并在大肠杆菌BL21（DE3）中成功诱导出了一个约50kD的融合蛋白.纯化后测定其糖基转移酶活性，与37℃相比，80℃的反应温度其活性能提高3.4倍左右.研究结果表明，该酶是一种具有应用潜力的嗜高温糖基转移酶.

短小芽孢杆菌；原核表达；糖基转移酶

糖基转移酶（EC 2.4.x.y）是自然界存在的最为多样性的一大类酶，糖基转移酶负责将活性供体的单糖部分转移至糖、蛋白质、脂类、核酸以及另外一些小分子，即完成糖基化反应，形成具有很多生物学功能的糖基化产物[1－2].糖基转移酶在所有生命体中都扮演着重要的生物学角色，日益引起人们的重视.蛋白质的糖基化修饰和天然糖蛋白的去糖基化是研究糖蛋白糖链结构和功能的重要手段之一.其中糖基转移酶是该反应中的有用工具.已纯化的糖基转移酶是目前糖基化工程中的重要酶，为研究糖蛋白糖链的结构与功能……