王彩澜，刘新育，李学琴，刘亮伟，陈红歌

(河南农业大学生命科学学院农业部农业微生物酶工程重点实验室，河南郑州，450002)

酸性α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌中的高效表达*

王彩澜，刘新育，李学琴，刘亮伟，陈红歌

(河南农业大学生命科学学院农业部农业微生物酶工程重点实验室，河南郑州，450002)

酸性α-淀粉酶是发酵行业用量最大的酶类，为了实现酸性α-淀粉酶基因的高效表达，将本实验室已经克隆得到的去信号肽的酸性α-淀粉酶基因在枯草芽孢杆菌WB600宿主中进行表达，成功的构建了表达菌株pHT43－amy/WB600。在初始菌浓度OD600为0.8时加入终浓度为0.9 mmol/L的IPTG，诱导6 h的条件下测得酶活力为1 230 U/mL，又由于宿主菌WB600外分泌蛋白较s少，因此具有明显的生产优势。

酸性α-淀粉酶基因，高效表达，枯草芽孢杆菌

α-淀粉酶(1，4-α-D-葡萄糖苷水解酶，EC 3.2.1.1)能够以淀粉为底物，从淀粉内部水解1，4-α-D-葡萄糖苷键，α-淀粉酶在淀粉加工以及味精、氨基酸、抗生素、乙醇等以淀粉为原料的发酵产品生产中具有重要的用途。酸性α-淀粉酶是指在较低 pH条件下(pH 4.0～5.0)仍能保持高酶活性的α-淀粉酶，作为一种极端环境淀粉酶在淀粉加工中显示出更大的应用价值。

目前，酸性α-淀粉酶尚没有工业产品，对酸性α-淀粉酶的研究多集中在产酶菌株筛选、异源高效表达等方面。枯草杆菌是发酵工业中的常用菌种，对人畜安全，是美国食品药物管理局(FDA)和中国农业部均批准使用的安全菌株。更为重要的是，外源基因在枯草芽孢杆菌中是分泌性表达，产物便于提取和纯化，这是大肠杆菌表达系统不可比拟的，因此枯草芽孢杆菌是极具潜力的基因工程宿主菌［1－2］。……