黄慧敏，张伟国

(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡，214122)

反相高效液相色谱法测定苹果酸发酵液中的有机酸

黄慧敏，张伟国

(江南大学工业生物技术教育部重点实验室，江苏无锡，214122)

采用反相高效液相色谱法分析测定苹果酸发酵液中的有机酸，最终确定了适用于发酵液中各种有机酸含量测定的色谱条件，色谱柱:COSMOSIL 5C18-PAQ(4.6 mm I.D.×250 mm);紫外检测波长:210 nm;流动相:1%乙腈-20 mmol/L KH2PO4溶液(pH 2.8);流速:0.5 mL/min;柱温:23℃。结果表明，在该条件下苹果酸发酵液中的7种有机酸都得到了较好分离，方法的回收率为94.2%～102.7%，表明具有较好的准确度和精密度。

反相高效液相色谱法，苹果酸发酵液，有机酸

L-苹果酸是一种重要的天然有机酸，其口感接近天然苹果的酸味，在国外是用量很大的一种酸味剂。在食品、医药、印染及化工等方面都有广泛的用途，已成为继柠檬酸、乳酸之后用量排第3位的食品酸味剂，是一种很有发展前途的有机酸新产品[1］。

直接发酵法是生产苹果酸的较有竞争力的方法[12-21］，如何快速准确地测定发酵液中的 L-苹果酸则是发酵过程中首先需要解决的问题。有机酸的定量测定方法有许多种[6-11］，而定量分析发酵液中苹果酸的方法[2］主要有2，7-萘二酚法和反相高效液相色谱法[3-5，8-9］。由于苹果酸发酵液成分复杂，包括残糖、菌体、蛋白和各种有机酸等物质，在采用2，7-萘二酚法测定苹果酸含量时需要使用浓硫酸，而浓硫酸具有强氧化性，可将许多物质氧化包括发酵液中的物质和试管中的残留杂质，从而对测定结果的准确性产生强烈的干扰;而反相高效液相色谱法操作简便，准确度高，重现性好，可同时定量多种有机酸，因此已获得广泛的应用[11，22-25］。……