王伟群 邵征洋 许先科 王孙尧 浙江省中西医结合医院儿科 杭州 310003

毛细支气管炎（bronchiolitis）是婴幼儿时期常见的严重急性下呼吸道感染性疾病，流行面广，发病率高，仅见于2岁以下的婴幼儿，多为6个月以内的小婴儿［1］。毛细支气管炎主要由病毒感染引起，急性呼吸道感染（acute lower respiratory infection，ALRI）患儿中病毒检出率为46.2%，说明病毒感染在ALRI中占有重要地位，其中呼吸道合胞病毒（respiratory syncytial virus，RSV）感染占63.8%［2］。本实验拟通过检测呼吸道合胞病毒感染大鼠血清肿瘤坏死因子α（TNF-α）、嗜酸细胞阳离子蛋白（eosinophil cation protein，ECP）及其肺组织病理，探讨加味麻杏石甘汤治疗呼吸道合胞病毒感染的作用机制。

1 实验材料

1.1 动 物 实验用清洁级雄性SD大鼠28只，体质量（180±10）g，由浙江中医药大学实验中心提供。

1.2 药 物 加味麻杏石甘汤水溶液由本院制剂室提供；地塞米松片由本院西药房提供；戊巴比妥钠由浙江中医药大学动物实验中心提供。

1.3 试 剂 呼吸道合胞病毒株（RSV）由浙江省疾病控制中心病毒所提供。TNF-α检测试剂盒由武汉博士德生物公司提供。ECP检测试剂盒由美国RapidBio Lab.公司提供。

2 实验方法

2.1 动物分组与呼吸道合胞病毒感染模型建立 28只大鼠按完全随机分组方法分成正常对照组、病毒感染模型组、加味麻杏石甘汤组和地塞米松对照组，每组7只。参照文献报道的方法建立呼吸道合胞病毒感染动物模型［3］：经腹腔注射戊巴比妥钠麻醉大鼠，用0.2mL呼吸道合胞病毒悬液滴鼻吸入，呼吸道合胞病毒的半数组织培养感染剂量（TCID50）为5×103；正常对照组给予生理盐水0.2mL滴鼻吸入；均1天1次，连续7天。

2.2 给 药 实验第8天开始，正常对照组、病毒感染模型组给予生理盐水10g/kg灌胃；加味麻杏石甘汤组按30g/kg灌胃；地塞米松组给予12mg/L地塞米松0.1mg/kg灌胃，1天1次，连续7天。灌胃结束后取腹腔静脉血5mL置于试管中，低温离心10min取血清，-40℃冰箱保存待测。

2.3 检测指标及方法

2.3.1 血清TNF-α、ECP测定 均采用双抗体夹心酶联免疫吸附法，按试剂盒说明书进行操作。

2.3.2 肺组织病理观察 新鲜大鼠肺组织经固定、脱水、透明、浸蜡、包埋、切片、HE染色［4］等处理，中性树胶封片，观察各组大鼠肺组织炎症变化情况。

2.4 统计学方法 应用SPSS 17.0统计软件。数据以均数±标准差（±s）表示，各组实验数据先进行正态性检验和F检验，若符合正态分布和方差齐性，则采用单因素方差分析，多重比较采用LSD法，若方差不齐，则进行多重秩和检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

3.1 各组大鼠血清TNF-α、ECP水平比较 与正常对照组比较，模型组TNF-α、ECP水平升高（P＜0.05，P＜0.01）；与模型组比较，加味麻杏石甘汤组、地塞米松组 TNF-α、ECP水平明显降低（P＜0.05或 P＜0.01）。加味麻杏石甘汤组与地塞米松组间差异无统计学意义（P＞0.05）。见表1。

表1 各组大鼠血清TNFα、ECP水平比较（±s） pg/mL

表1 各组大鼠血清TNFα、ECP水平比较（±s） pg/mL

注：与正常组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与模型组比较，*P＜0.05，**P＜0.01

正常组模型组加味麻杏石甘汤组地塞米松组7 7 7 7 10g/kg 10g/kg 30g/kg 0.1mg/kg 151.64±51.41 226.11±72.29△105.77±34.60**157.64±57.85*7.70±1.43 12.63±1.73△△7.69±1.85**4.86±2.24**

3.2 各组大鼠肺组织病理 正常组大鼠支气管、肺组织结构完整，支气管黏膜上皮完整，未见明显的炎性细胞浸润，肺泡壁无增厚，无充血。模型组大鼠可见肺泡壁中重度增厚（2～3级），肺间质可见大量淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞浸润。加味麻杏石甘汤组大鼠肺泡壁轻中度增厚（1～2级），肺间质见中等量淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞浸润。地塞米松组大鼠肺泡壁轻度增厚（1级），肺间质偶见淋巴细胞浸润，见图1～4。

4 讨 论

肿瘤坏死因子α（TNF-α）是哮喘启动因子，是气道强有力的刺激剂。研究显示，毛细支气管炎患儿血清中肿瘤坏死因子α水平显著高于正常儿童［5］。

嗜酸细胞阳离子蛋白（ECP）是活化的嗜酸性粒细胞（EOS）分泌的一种核糖核酸酶，是嗜酸性粒细胞的特异性标志物之一。ECP是一种单链、含锌、强碱性糖蛋白，储存在嗜酸性粒细胞的胞浆颗粒中，约占嗜酸性粒细胞胞浆颗粒的30%。ECP与气道高反应、通气功能均存在一定的相关性，是嗜酸性粒细胞激活的标志［6］。ECP能直接损伤气道上皮细胞，导致气道高反应、气道痉挛和肺功能受损［7］，是反映哮喘患者气道炎症发生、发展变化的主要指标。临床研究显示，ECP与哮喘气道炎症的强度相关，可反映气道高反应性发展的早期阶段，并可作为监测儿童哮喘病情严重程度的指标，指导临床用药［8］。

图1 正常对照组（HE ×400）

图3 加味麻杏石甘汤组（HE ×400）

加味麻杏石甘汤由麻黄、杏仁、生石膏、甘草、僵蚕组成，具有宣肺平喘，清热解表功效。药理研究证实，麻黄主要成分为麻黄碱，有拟肾上腺素样作用，还能阻止过敏介质的释放，缓解支气管黏膜肿胀；生石膏清热除烦，其主要成分含水硫酸钙，具有解热、镇静、消炎作用；僵蚕能抑制细胞因子IL-1、TNF-α和细胞黏附分子ICAM-1、VCAM-1等基因转录，减少哮喘相关的炎症因子合成分泌，控制支气管平滑肌细胞增生，减少炎症细胞在肺组织中的浸润［9］。

本研究中，加味麻杏石甘汤组大鼠血清TNF-α、ECP明显下降（P＜0.05，P＜0.01）；光镜下大鼠肺组织病理显示，肺泡壁轻中度增厚（1～2级），肺间质见中等量淋巴细胞、浆细胞、嗜酸性细胞浸润，与RSV感染模型组比较有显著改善。加味麻杏石甘汤组和地塞米松组TNF-α、ECP水平明显低于RSV感染模型组（P＜0.05或P＜0.01），但加味麻杏石甘汤组与地塞米松组比较，差异无统计学意义（P＞0.05）。结果显示加味麻杏石甘汤疗效与地塞米松相当，可以有效抑制呼吸道合胞病毒感染模型大鼠血清TNF-α、ECP，减轻过敏性炎症，有效预防喘息再发，从而降低哮喘的发病率。

图2 RSV感染模型组（HE ×400）

图4 地塞米松组（HE ×400）

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