周 勇 杭州市红十字会医院 杭州 310003

赵 玮 宋 康 浙江中医药大学附属第一医院 骆仙芳 浙江中医药大学附属第二医院

致命性哮喘几乎都有黏液栓（痰栓）引起的气道闭塞。黏蛋白（mucin，MUC）作为气道内黏液的主要成分，对其黏、弹性起着重要作用，黏蛋白的分泌及其调控因素则成为人们关注的焦点。IL-4也是重要的炎症细胞因子，在诱导杯状细胞增生和黏蛋白表达中也发挥重要作用。椒枝软胶囊是浙江省中医院治疗哮喘经验方，前期药效学研究证实其具有良好的平喘、镇咳、抗炎作用[1]。本研究通过观察其对哮喘大鼠IL-4表达的影响，探讨其抑制哮喘气道黏蛋白（液）高分泌的作用机制。

1 实验材料

1.1 动 物 雄性SD大鼠48只，清洁级，体质量200±20g，由浙江中医药大学动物实验中心提供。

1.2 药物和主要试剂 椒枝软胶囊由浙江省中医院制剂室提供，批号20081002，每mL内容物含椒目油802mg、皂苷粉80mg。卵蛋白（GradeⅤ），购自美国Sigma公司；IL-4 ELISA试剂盒，批号20081222，购自晶美生物技术公司。

1.3 主要仪器 WH-2000超声雾化器，广东粤华医疗器械厂；Du-640紫外分光光度仪，美国Backman公司。

2 实验方法

2.1 分 组 48只SD大鼠随机分成空白对照组、模型组、阳性对照组和椒枝软胶囊低、中、高剂量组，每组8只。

2.2 大鼠哮喘模型建立 实验第1天、第8天取0.1%卵白蛋白氢氧化铝凝胶混悬液1mL致敏大鼠，采取多点注射方式：腹腔0.4mL，两后足跖皮下各0.05mL，双腹股沟皮下各0.05mL，双侧胸部、颈部及背部皮下各0.1mL。第15、16、17天将大鼠置于30cm×40cm×40cm大小的玻璃容器中，以1%OVA生理盐水溶液雾化攻击20min，诱发哮喘，每天1次，连续3天。空白对照组以生理盐水代替OVA注射和雾化攻击，操作方法同前。

2.3 给 药 于实验第13天起开始灌胃，1天1次，连续5天。空白对照组和模型组每天灌胃生理盐水10mL/kg，强的松组每天灌胃强的松溶液10mg/kg，椒枝软胶囊低、中、高剂量组每天分别给予椒枝软胶囊溶液315、787.5和1575mg/kg灌胃。

2.4 标本收集和制备 腹腔注射2%戊巴比妥钠2.3mL/kg麻醉大鼠，10mL无菌注射器下腔静脉取血，3000rpm离心10min，取上清液，-70℃保存。

2.5 血清IL-4测定 采用ELISA法，严格按照试剂盒说明书步骤操作。

2.6 统计学方法 使用SPSS13.0统计软件包，各组数据采用均数±标准差（±s）表示，计量资料比较用单因素方差分析（one-way ANOVA），以P＜0.05为差异有统计学意义。

3 实验结果

模型组、强的松组、椒枝软胶囊低、中、高剂量组血清IL-4水平均高于空白对照组，差异有统计学意义（P＜0.05，P＜0.01）；强的松组、椒枝软胶囊高、中剂量组血清IL-4水平均低于哮喘模型组，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）；椒枝软胶囊高、中、低剂量组血清IL-4水平均高于强的松组，差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）；椒枝软胶囊高剂量组血清IL-4水平低于椒枝软胶囊低剂量组，差异有统计学意义（P＜0.05），见表1。

表1 各组大鼠血清IL-4水平比较（±s）

表1 各组大鼠血清IL-4水平比较（±s）

注：与空白对照组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与模型组比较，△P＜0.05，△△P＜0.01；与强的松组比较，■P＜0.05，■■P＜0.01；与椒枝软胶囊低剂量组比较，*P＜0.05

组 别空白对照组模型组强的松组椒枝低剂量组椒枝中剂量组椒枝高剂量组n/只8 88888 IL-4/（pg/mL）11.89±2.02 27.73±2.36▲▲15.82±4.03▲△△25.14±5.61▲▲■■22.49±4.71▲▲△■■20.65±4.38▲▲△△■*

4 讨 论

支气管哮喘是多种细胞因子参与的气道慢性炎症，目前认为气道炎症是杯状细胞结构与功能出现异常的直接诱因之一。Wardlaw[2]通过实验证实IL-4通过诱导CD23m RNA转录增加，从而上调IgE，参与哮喘发病。IL-4也可通过趋化作用使EOS在气道聚集[3]，在气道炎症中发挥重要作用。由于气道炎症作用导致杯状细胞增生或化生，使气道黏液分泌增加。研究表明，IL-4能诱导黏蛋白基因表达增强，黏蛋白合成增加，黏液糖蛋白在非纤毛上皮细胞堆积，并诱导黏液释放[4]。

哮喘急性发作期存在气道黏蛋白高分泌，引起气道黏液黏弹性增高，痰液黏稠。中医认为，痰液稠厚与热有关，痰、涎、涕等分泌物澄澈清冷属寒证，痰涕黄稠属热证。一般认为，中医哮喘急性发作与痰热相关，而清热解毒中药具有免疫调节功能。

椒枝软胶囊由椒目和蚤休（七叶一枝花）中提取的椒目油与蚤休皂苷粉所组成，具有清热平喘功效。其中椒目能“定痰喘”、“劫痰喘”。椒枝软胶囊治疗哮喘急性发作，契合中医“痰”、“热”、“喘”病机特点。本实验结果表明，椒枝软胶囊可能通过降低模型大鼠血清中IL-4水平减轻哮喘气道炎症和抑制杯状细胞增生和（或）化生，进而减少气道黏蛋白分泌、减少黏液分泌。

［1］宋康，柴秀娟，骆仙芳，等.椒枝软胶囊的药效实验研究［J］.浙江中医学院学报，2003，27（4）:62-65.

［2］Wardlaw AJ.Eosinohils in the 1990s：new perspectives on their role in health and disease［J］.Postgvad Medt J，1994，70（826）:536-552.

［3］Shi HZ，Deng JM，Xu H，et al.Effect of inhaled interleukin-4 on airway hyperreactivity in asthmatics［J］.Am J Respir CriticalCareMed，1998，157:1818-1821.

［4］Temann UA，Prasad B，Gallup MW，et al.A novel role for murine IL-4 in vivo:induction of MUC5AC gene expression and mucin hypersecretion［J］.Am JRespir Cell Mol Biol，1997，16（4）:471-478.