内脏高敏感大鼠结肠Cajal间质细胞C-KIT表达增加
2012-12-07丁瑞峰王爱鱼王宏杰郭元虎赵鹏程
丁瑞峰,王爱鱼,王宏杰,郭元虎,赵鹏程
(包头医学院第一附属医院消化科,内蒙古包头014010)
功能性胃肠病(functional gastrointestinal disorders,FGIDs)是以消化系统症状为临床表现,而应用生化、影像学和内镜检查等并未发现器质性病变的一类胃肠道疾病[1]。认为其发病与内脏感觉、炎性反应、肠神经系统甚至中枢神经系统调节功能等因素有关,而内脏高敏感是功能性胃肠病症状产生的主要原因之一。Cajal间质细胞(interstitial celIs of cajal,ICC)被认为是胃肠慢波的起搏细胞,是调节胃肠运动的重要环节[2]。本研究通过直肠注射冰醋酸建立内脏高敏感大鼠模型[3-4],探讨ICC在内脏高敏感中的作用。
1 材料与方法
1.1 材料
清洁级新生Wistar大鼠[内蒙古大学实验动物中心提供,生产许可证号:SCXK(蒙)2007-0001],每8~10只与其母鼠共同饲养在同一箱内,发育至25 d后,将母鼠与幼鼠分离。分离后的大鼠雌雄分离,每4只∕笼,给予足够的食物、水。所有大鼠均在安静室温下饲养,昼夜控制为12 h周期。C-KIT一抗和 β-actin为兔多克隆抗体(武汉博士德公司),二抗为辣根酶标记山羊抗兔IgG(北京中杉金桥公司)。
1.2 方法
1.2.1 动物模型的建立:参照文献[3-4],新生大鼠16只随机分为2组,对照组大鼠自出生后8~21 d每日上午将石蜡油润滑后的连续硬膜外导管(直径1.0 mm)缓慢经肛门插入0.5~1.0 cm,注入0.9%氯化钠注射液0.3~0.5 mL,实验组注入0.6%冰醋酸溶液0.3~0.5 mL。从第21天后不进行任何实验操作。
1.2.2 肠道敏感性评估:8周龄时行直肠扩张(colorectal distention,CRD),观察大鼠腹部撤离反射(abdominal withdrawal reflex,AWR)评分。清醒状态下,将石蜡油润滑后的8F导尿管经肛门插人,气囊末端距离肛门1.0 cm。用胶布把导管和大鼠尾巴根部缠在一起,固定气囊,将其放在特制的透明塑料笼(20 cm×8 cm×8 cm)内,大鼠在此笼内只能前后运动,不能转身。……
