田海龙，李惠武，李 卉，段明军，姜孝芳，白靖平*

(新疆医科大学1.附属肿瘤医院;2.基础医学院细胞与分子生物教研室;3.第一附属医院医学中心，新疆乌鲁木齐830000)

神经胶质瘤的发病率占原发颅内肿瘤第1位。临床针对胶质瘤进行手术辅助放化疗的综合治疗，但治疗效果并不理想。近年来发现Hedgehog(Hh)信号通路的异常激活在胶质瘤的发生发展中起重要作用。该通路通常通过核转录因子Gli-1(glioma-associated oncogene homolog 1，Gli-1)发挥作用。Gli-1成为Hh信号最终的响应者和功能的执行者，其核酸水平的表达是Hh通路早期活化的标志，是整个通路最主要的环节［1－2］，Gli-1的异常高表达可能促进胶质瘤发生和发展。

卡莫司汀(carmustine，BCNU)是治疗脑肿瘤常用的药物之一，但静脉注射该药对骨髓、肝脏和肺脏的不良反应大，限制药物的临床应用［3］。为探索更理想的胶质瘤治疗方法，本研究观察siRNA联合BCNU影响胶质瘤细胞凋亡和增殖的作用效果，探讨其机制。

1 材料与方法

1.1 材料

人胶质瘤U251细胞(中国科学院上海细胞生物学研究所);RPMI1640和胎牛血清(Gibco公司);反转录试剂盒及Trizol(Invitrogen公司);AnnexinⅤ凋亡试剂(上海晶美公司);siRNA和脂质体LipofectamineTM2000(上海吉玛公司);兔抗人 Gli-1、BCL-2、cycinD1和BAX多克隆抗体(武汉博士德公司);Western blot试剂盒及碘化丙啶(Propidiumiodide，PI)(Sigma公司);BCNU注射液(上海伊明公司)。

1.2 方法

1.2.1 细胞系培养:含1×105U/L青霉素、100 mg/L链霉素和10%灭活胎牛血清的RPMI1640作为培养基，复苏U251胶质瘤细胞，5%CO2、37℃培养，2～3 d传代1次。取对数生长期的细胞用于实验。

1.2.2 siRNA-Gli-1合成、转染及浓度筛选:根据人Gli-1序列(Genbank，NM_00116 0045)中转录RNA的作用位置及小分子干扰RNA(small interfering RNA，siRNA)设计原则，确定人Gli-1的siRNA目标寡核苷酸……