段湘兰 谢果珍 刘叶蔓.*

（1 湖南省农科院职工医院，长沙410125；2 湖南中医药大学，长沙410128）

凹叶厚朴 Magnolia officinalis Rehd. et Wils. Subsp.biloba(Rehd. et wils.)Law为木兰科落叶乔木，其药用有效成分主要为厚朴酚及和厚朴酚。凹叶厚朴在20a左右成材入药。近年来，野生资源濒临枯竭，凹叶厚朴已被列为国家Ⅲ级保护植物。植物是重要的天然药物资源，应用植物细胞悬浮培养技术可批量生产有用的植物药物及其次生代谢物质。通过细胞悬浮培养生产大量成分均一的植物细胞培养物，是解决药用植物资源匮乏的理想途径，这一技术，已成为继微生物技术以后当代生物技术重要的发展领域。而以培养药用植物细胞直接生产天然药物的研究又成为这一领域的新热点[1-2]。本文作者前期对凹叶厚朴组织培养试验结果表明，在凹叶厚朴愈伤组织中，有效成分的含量甚微[3]，限制了凹叶厚朴的生物技术利用。本试验在此基础上开展凹叶厚朴的悬浮细胞培养及其生理特性研究，为建立凹叶厚朴高产细胞系奠定基础。

1 材料与方法

1.1 材料 以凹叶厚朴茎段诱导愈伤组织，继代培养半年[3]，选择质地疏松、生长旺盛的愈伤组织作为试验材料。

1.2 方法

1.2.1 种子细胞的培养 称取愈伤组织4g，用镊子夹碎接种于 100ml新鲜的液体培养基中，培养基配方为B5+1.5 mg／L NAA+0.5mg／L 6-BA，蔗糖 20g/ L。培养8 d后，先用40目纱网过滤去除大的细胞团，然后按1:3体积转入新鲜培养液，继代培养4d后，再用80目纱网过滤。将含较小细胞团的滤液经4次继代培养后，获得较均一的细胞悬浮培养物，以此作为悬浮培养的种子细胞。……