丁志明，武海阔，王 军

（天津中医药大学第一附属医院外科，天津 300193）

胶原蛋白是蛋白质的一种，是细胞外基质（ECM）的主要成分，既往研究表明胶原蛋白升高是导致组织器官纤维化的重要原因之一[1]。糖尿病周围血管病变中，血管纤维化可能是重要致病因素，与胶原蛋白的关系较为密切，本实验目的在于对中药干预下的糖尿病大鼠动脉损伤模型的胶原蛋白的表达进行研究，为糖尿病大鼠动脉损伤纤维病变学说和中药干预糖尿病血管并发症的可行性提供实验学依据。

1 材料与方法

1.1 实验材料

1.1.1 实验动物 雄性SD大鼠48只，清洁级，2月龄，体质量 200～250 g。

1.1.2 实验药物 加味桃核承气汤（桃仁10 g，大黄 6 g，桂枝 6 g，甘草 3 g，芒硝 6 g，黄芪 30 g，生地15 g，麦门冬 12 g，玄参 12 g），减压浓缩至浓度为0.76 g/mL，大鼠用药剂量为6.07 g/（kg·d），4℃冰箱冷藏备用；盐酸二甲双胍片，研碎，与生理盐水配成0.1%的溶液，大鼠用药剂量为0.14 g/（kg·d），相当于人的等效剂量；精蛋白锌胰岛素注射液；生理盐水。

1.1.3 实验仪器 血糖仪、显微镜、CMOS、多功能真彩色细胞图象分析管理系统、切片机、离心机、电子天平、移液器、干燥箱、低温冰箱、恒温水浴箱、医用微波炉等。

1.1.4 实验试剂 SP免疫组化试剂盒、浓缩型DAB显色剂试剂盒、多聚赖氨酸、兔抗鼠TGFβ1多克隆抗体、枸橼酸盐缓冲液、磷酸盐缓冲液（PBS）。

1.2 实验方法

1.2.1 实验分组 共48只大鼠，按照随机数字表法随机分为：A-正常对照组（n=12），B-糖尿病对照组（n=12），C-中药治疗组（n=12），D-二甲双胍治疗组（n=12）。其中 A 组为正常血糖组；B、C、D 3组共36只大鼠造糖尿病模型。

1.2.2 实验干预 B、C、D组共36只大鼠成功造模后，全部予普通饲料喂养，每日予适量长效胰岛素皮下注射，前5周每周2次尾静脉取血测血糖，后7周每周1～2次监测血糖。……