李巧芬，常 柏

（1.天津中医药大学，天津 300193；2.天津医科大学代谢病医院，天津 300070）

糖尿病难治性溃疡是导致糖尿病患者截肢致残的主要原因。随着全球性糖尿病患病人数的增加，糖尿病患者人均寿命的延长以及老龄化的趋势，因糖尿病溃疡而需要截肢的患者也在增加[1]。据统计1996年全球糖尿病患者为1.2亿，预计到2025年，将达到2.5亿以上，而大约15%的糖尿病患者将发生溃疡或坏疽[2]。笔者应用生肌象皮膏在临床上治疗糖尿病溃疡取得良好效果[3]，下面笔者对2型糖尿病大鼠溃疡创面肉芽组织的胰岛素样生长因子-1及受体的含量的动态观察，探讨生肌象皮膏促进糖尿病大鼠难治性溃疡愈合的机制。

1 实验材料

1.1 实验动物 Wistar大鼠，雄性，清洁级，体质量（180±20）g，北京大学医学部实验动物中心提供，动物合格证号：SCXK（京）2010-0034。

1.2 实验试剂 氯仿、异丙醇、无水乙醇、（天津中医药大学中医药研究中心）；RNase-free离心管；200μL和 1000 μL Tips；Tris、DEPC（美国 Sigma 公司）；RT-PCR一步法试剂盒、引物合成、PCR小管、1.5 mL离心管（RNase free、宝生物工程有限公司）；TRIZOL Reagent（Invitrogen公司）。引物：IGF-ⅠRF：5-CGCTGTGTGGACCGGGATTT；IGF-ⅠRR:5-GCATGCACTCGCCATCGTG；IGFF：5-GAAGGTGAAGGTCGGAGTC；IGFR：5-GAAGATGGTGATGGGATTTC，由北京三博远志生物技术有限公司合成。

1.3 实验仪器 Universal 16R低温高速离心机（Beckman公司）；BIPrisnxr7000PCR仪（PE公司）。

2 实验方法及步骤

2.1 动物模型的制备 160只雄性Wistar大鼠，适应性喂养1周后，随机抽取40只作为正常对照组，给予标准饲料喂养，其余120只为造模组给予高脂饲料喂养。8周后，空腹眼眶采血测空腹血糖和胰岛素计算胰岛素敏感指数（ISI=Ln[（FBG）（FINS）]-1），判断动物出现胰岛素抵抗后，尾静脉注射1%链脲佐菌素（STZ）30 mg/kg，1周后检测血糖，随机血糖≥16.7 mmol/L，视为糖尿病造模成功，选取120只造模成功大鼠按照血糖和体质量分层随机分为糖尿病对照组、凡士林组、生肌象皮膏组。……