钟继娟 缪 珩

糖尿病肾病（diabeticn ephropathy，DN）是糖尿病晚期最主要的并发症之一。DN主要表现为肾脏肥大、肾小球及肾小管基底膜增厚、肾小球内高灌注、高跨膜压并逐渐进展为肾小球细胞外基质增生、肾小球硬化，最终发展为肾功能衰竭[1]，已成为糖尿病患者最主要的死亡原因之一。DN发生发展的危险因素除高血糖之外，还与高血压、高血脂、胰岛素抵抗（IR）等有关。目前常用的治疗DN的药物有代文、阿托伐他汀和匹格列酮，有研究表明这3种药物均具有独立于其基本的降压、降脂、改善IR作用之外的肾脏保护作用[2-5]，但其作用机制尚不明确。本研究采用体外培养的方法，分别观察3种药物对高糖条件下培养的大鼠肾脏系膜细胞转化生长因子（TGF）-β1、纤维连接蛋白（Laminin，LN）、Ⅳ型胶原（Type Ⅳ Collagen，C-Ⅳ）、TGF-β1mRNA、肾上腺髓质素 （adrenomedullin，AM）mRNA以及补体因子H （complement factor H，Cfh）mRNA 表达的影响，并探讨其作用机制。

1 材料与方法

1.1 材料及试剂 大鼠肾小球系膜细胞（HBZY-1）购自中国典型培养物保藏中心（武汉大学保藏中心）。RPMI-1640培养基（美国Sigma公司）、胰蛋白酶（美国GIBCO BRL公司），新生胎牛血清 （NCS，杭州四季青公司），4-羟乙基哌嗪乙磺酸（HEPES，美国 Sigma公司），二甲基亚砜（DMSO，美国 Sigma公司）。匹格列酮标准品系恒瑞公司惠赠，TGF-β1酶联免疫吸附（ELISA）测定试剂盒（美国 Genzyme公司），LN和C-Ⅳ放免测定试剂盒（上海海军医学研究所生物技术中心），Trizol（美国Promega公司）。

1.2 方法

1.2.1 药品配制 代文、阿托伐他汀和匹格列酮均用DMSO溶解，然后用不完全RPMI-1640培养基配成0.03 mmol/L母液，-20℃冰箱保存备用。

1.2.2 细胞培养 （1）将HBZY-1细胞培养于含10%FCS的RPMI-1640培养液中，置37℃、5%CO2培养箱，实验共分为：低糖对照（5.6 mmol/L，LG）、高糖对照（30 mmol/L，HG）、高糖+代文（10 μmol/L，HD）、高糖+阿托伐他汀（10 μmol/L，HL）、高糖+匹格列酮（10 μmol/L，HP）5 组。……