丁晓松 李卫萍 沈絮华 武 星 李虹伟

冠心病患者常合并糖代谢异常，糖尿病作为冠心病的等危症可通过胰岛素抵抗、氧化应激等机制引起内皮功能障碍及血管舒缩功能异常[1]。RhoA/ROCK信号通路是近年来研究较多的一个参与血管舒缩功能调节的信号通路。RhoA通过激活ROCK使肌球蛋白轻链活化并抑制其失活，导致平滑肌细胞（VSMC）收缩[2]。肾素-血管紧张素系统（RAAS）和Rho/ROCK通路均可通过影响NO合成酶（eNOS）和NO导致血管功能紊乱[3]。有研究显示具有部分过氧化物酶体增殖物激活受体（PPAR）-γ激动作用的血管紧张素Ⅱ（AngⅡ）1型受体（AT1）阻滞剂替米沙坦能改善糖尿病时血管内皮功能[4]。本文旨在通过观察替米沙坦对胰岛素抵抗大鼠冠状动脉RhoA及ROCK表达水平的影响，初步探讨Rho/ROCK通路是否参与替米沙坦对糖代谢异常时血管内皮功能调节的机制。

1 材料与方法

1.1 材料 8周龄清洁级雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠34只，体质量（200±20）g，购自北京维通利华实验动物技术有限公司，于中国医学科学院药物研究所动物部进行喂养。尼康SMZ645体视解剖显微镜，Mastercycler普通 PCR仪，Gene Amp PCR DG-II暗箱式紫外透箱仪，Mini-PROTEAN 3 Elecreophoresis Cell电泳仪 ，山羊抗大鼠 ROCK1抗体（SANTA，sc-6055），山羊抗大鼠 ROCK2抗体（SANTA，sc-1851），家兔抗大鼠 RhoA 抗体 （Bioworld，BS1782），替米沙坦（Tel）片购于上海勃林格殷格翰药业有限公司。逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）试剂盒购于Invitrogen生物技术有限责任公司。总蛋白提取试剂盒购于ProMab公司，天然膜蛋白抽提试剂盒和天然浆/核蛋白分离抽提试剂盒购于MERCK公司。

1.2 方法

1.2.1 胰岛素抵抗大鼠模型建立 34只大鼠，每笼3只分笼喂养，置于温度22℃～24℃，湿度60%，每日光照12 h，自由饮水的环境中适应性喂养1周后，随机抽取24只大鼠予高果糖饲料喂养，高果糖饲料购自中国医学科学院实验动物研究所。……