西电集团医院妇产科 （西安710077）

王 丽 苏宝山▲ 吴 静▲

近年来体内外大量研究表明，苦参碱（Matrine，Mat）的抗肿瘤作用全面而广泛，但对这些作用机制的研究较少，至今仍不清楚。目前普遍认为，肿瘤的发生是机体组织过度增生与凋亡不足，增生与凋亡失衡的结果。Bcl-2、COX-2、Fas、Fas L蛋白均是细胞凋亡通路中发挥重要作用的分子，与肿瘤发生、发展关系密切，对它们的研究，能更深入的了解肿瘤发生的病因学，并指导肿瘤的临床治疗。研究表明，宫颈癌组织中COX-2、Bcl-2和Fas L均呈高表达，Fas表达下降，肿瘤细胞处于无限增殖状态，发生浸润、转移［1，2］。本实验前期已通过MTT法及流式细胞仪（FCM）检测证实Mat有抑制宫颈癌Hela细胞的增殖，诱导其凋亡作用，在此基础上，进一步用免疫细胞化学法检测 Mat作用宫颈癌 Hela细胞72h后，Hela细胞中Bcl-2、COX-2、Fas、Fas L蛋白的表达水平，初步探讨 Mat抑制宫颈癌Hela细胞的增殖，诱导其凋亡可能的作用机制，为Mat应用于临床肿瘤治疗提供理论依据。

材料和方法

1 材 料

1.1 人宫颈癌Hela细胞株：由西安交通大学医学院癌症研究所惠赠。

1.2 主要试剂：Mat纯度为98%，购自陕西昂盛生物医药科技有限公司；RPMI-1640培养基为美国GIBCO产品；小牛血清（BCS）杭州四季青生物工程材料研究所；SP试剂盒为武汉博士德生物技术公司。鼠抗人Bcl-2单克隆抗体、鼠抗人COX-2单克隆抗体、鼠抗人Fas单克隆抗体、鼠抗人Fas L单克隆抗体均购自美国Santa Cr uz公司产品，北京中山生物技术有限公司分装。

1.3 主要仪器和设备：CO2培养箱（SHEL-LAB型，美国），超净工作台，6孔细胞培养板（美国Costar公司）。

2 方 法

2.1 细胞培养：将宫颈癌Hela细胞用含10%小牛血清（BCS），青霉素100 U／ml，链霉素100μg／ml的RPMI 1640培养基，置于37℃、含5%CO2饱和湿度培养箱孵育传代培养。……