史竞艳,罗辛茹,2,鲍江鸿,赵子德,黄丹,向乾坤

(1.武汉生物工程学院化学与环境工程系,湖北 武汉 430415;2.湖北大学化学化工学院,湖北 武汉 430062)

超氧化物歧化酶(SOD)是一种以超氧阴离子O2·-为底物的金属酶,能催化超氧自由基发生歧化反应,是机体内O2·-的天然消除剂,对机体细胞起保护作用,在防御O2·-的毒性、抗衰老[1]以及预防肿瘤和抗炎[2-3]等方面起着重要的生理作用.自1969年McCord和Fridovich[4]首次从牛红细胞中分离出超氧化物歧化酶以来,陆续在各种不同的生物组织都分离纯化出SOD,并对SOD的物理、化学、药理、临床和作用机理等方面进行了广泛研究,建立了多种活力测定方法[5].其中采用较多的是邻苯三酚法,这种方法具有操作简单、快速、试剂便宜且用量小、重复性好等优点,但文献报道的邻苯三酚法测定超氧化物歧化酶活性的测定条件各不相同,而且研究的影响因素不够全面,这就造成了测定结果的混乱和缺乏可比性,为此我们对邻苯三酚自氧化法测定SOD活性的实验条件进行详细研究,探讨测活体系中缓冲溶液的pH值、温度、所含EDTA的浓度、邻苯三酚的浓度以及SOD酶浓度等因素对测定结果的影响,找出邻苯三酚测定超氧化物歧化酶活性的最优条件,其结果可对实际工作起到一定的指导作用,也可为进一步的酶促反应动力学研究提供实验和理论依据.

1 实验部分

1.1试剂与仪器试剂:牛血SOD(98%,活力为3 000 U),三羟甲基氨基甲烷(Tris,99.9%),盐酸(开封东大化工有限公司),乙二胺四乙酸二钠(EDTA-Na2,99.0%,天津……