刘 勇，袁 晟

(江西省人民医院病理科，江西 南昌 330006)

标准化是组织病理学实验室建设和发展的方向之一[1]，也是病理科质量控制的重要组成部分，而标准化的主要内容是技术的标准化，苏木精-伊红(HE)染色方法是病理科最常用的染色方法，被称为常规染色方法，所以，HE染色的标准化更是病理科质控的重中之重。组织芯片(组织微阵列)一般是指将数十至上千个小组织整齐地排放在一张载玻片上而制成的组织切片[2]。我们采用组织芯片技术制作了人体不同正常组织和不同肿瘤组织的组织芯片，分组进行了HE染色实验，旨在不同类型的组织中找到一个标准的染色程序。

1 材料与方法

1.1 材料 从我院病理科2010年送检新鲜标本中收集不同病理组织60例制作组织芯片，其中淋巴组织、胃肠腺上皮、皮肤鳞状上皮、皮下结缔组织、骨骼肌组织、子宫平滑肌组织、肝脏组织、乳腺组织、肺组织、胰腺组织各3例；淋巴肿瘤组织、胃肠肿瘤组织、皮肤鳞状上皮肿瘤组织、肺肿瘤组织、乳腺肿瘤组织、肝脏肿瘤组织、子宫平滑肌肿瘤组织、骨骼肌肿瘤组织，胰腺肿瘤组织、甲状腺肿瘤组织各3例。所有标本均按中华医学会编著的《临床技术操作规范—病理学分册》的要求进行组织前处理。Mayer苏木素染色液、伊红Y染色液均购自贝索公司。

1.2 组织芯片制作 组织芯片制作：将熔化石蜡(加入等量的蜂蜡)制作4.0cm×2.0cm×1.0cm大小的空白蜡块，设计10×6点组织列阵，用打孔机制成模块。将原蜡块放在45℃温箱中烘5-10min，然后，用打孔针从组织块选定部位逐个取出组织芯，组织芯直径2mm，将组织芯放入预先设计的阵列模块中，排布成组织芯片。最后，将制成的组织芯片面朝下放在铜板上，于55℃放置30min，轻压模块使组织芯在模块中排平。对组织芯片蜡块切片,切下的组织平整地粘贴于载玻片上。

1.3 方法 将HE染色中的几个关键步骤进行分组染色：①其中烤片温度分成5组：A：65℃ 30h、B：70℃ 30min、C：75℃ 30min、D：80℃ 20min，E：85℃15min。②Mayer苏木素染色分成3组：Ⅰ：2min、Ⅱ：4min、Ⅲ：6min。③伊红Y染色分成3组：a组：2min、b组：3min、c组 4min。 进行交叉分组染色。

2 结果

2.1 60例人体不同组织和肿瘤组织的组织芯片，每张组织芯片上60个样品，排列整齐，外形为圆形或类圆形，较少的皱折和掉片现象(图1)。

2.2 五个烤片组中，C、D、E三组切片的细胞、组织不够清晰，染色色彩不鲜艳，A、B两组细胞组织清晰，染色色彩鲜艳，但A组有少许组织掉片。

2.3 Mayer苏木素染色的三个染色组：I组切片，染色稍淡，对于一些皮下结缔组织、平滑肌组织的细胞核显示不够清楚，II组切片显示各类组织中的细胞核清晰，核膜、染色质清晰可见，胞浆红色鲜艳，未见苏木素染色；III组切片染色过深，某些淋巴组织、大部分肿瘤组织的细胞核核膜、染色质显示不清晰。

图1 组织芯片排列整齐，外形为圆形或类圆形(HE染色×100)

2.4 伊红Y染色组：a组切片：伊红染色稍淡，颜色不够鲜艳。一些纤维结缔组织染色过浅；b组切片：伊红染色深浅适中，颜色清晰艳丽，颜色层次分明，与蓝色的细胞核对比突出。c组切片：染色稍深，颜色层次不分明，部分细胞核有伊红着色至细胞核呈紫蓝色，与细胞核对比不突出。

2.5 本实验显示，用70℃烤片30min，苏木素染色4min，伊红染色3min的实验组进行HE染色效果最佳，组织结构清楚，细胞核苏木素染色呈蓝色，核膜、染色质清晰可辨，胞浆伊红染色层次分明，颜色鲜艳(图 2)。

图2 细胞核清晰，核膜、染色质清晰可见，胞浆层次分明，颜色鲜艳(HE染色×400)

3 讨论

组织芯片技术原理：组织芯片是通过组织芯片制作机细针打孔的方法，从众多的组织蜡块(供体蜡块)中采集到数十至上千的圆柱形小组织(组织芯)，并将其整齐排放到另一个空白蜡块(受体蜡块)中而制成组织芯片蜡块。然后，对组织芯片蜡块进行切片，再将切片转移到载玻片上制成组织芯片。组织芯片的特点是：体积小，信息含量大，一次性实验即可获大量结果。组织芯片可做HE染色、特殊染色、免疫组织化学染色、DNA和RNA原位分子杂交、荧光原位杂交。组织芯片蜡块可做100～200张连续切片。这样用同一套组织芯片即可迅速地对上百种生物分子标记 (如抗原、DNA和RNA)进行分析、检测，因而倍受组织病理学家的重视[3]。1998年Kononen等[4]首次采用组织芯片技术将645例乳腺癌组织固定于载体上，同时进行多种基因的检测，结果发现erbB-2和myc表达在雌激素受体(ER)阴性者明显高于ER阳性者，p53阳性者明显高于p53阴性者，而CCND1基因则与p53、ER、erbB-2表达无明显关系。从此，众多学者开始对组织芯片技术进行研究，组织芯片技术不断发展和完善，其应用也愈来愈广泛[5，6]。

我们制作了60例人体不同组织和肿瘤组织的组织芯片，仅用几张芯片即完成了全部实验，极大节约了研究经费和降低了劳动量，因此，应用组织芯片大规模高效检测临床组织样本是可行的，组织芯片技术与传统的病理学技术方法相比，具有快速、方便、经济、准确的特点，其应用前景广阔。

HE染色方法的建立已有一百多年历史，其技术虽已很成熟，但由于不同组织内所含的成分不同，导致组织与玻片的粘附力不同；苏木素和伊红对不同组织的染色力也有一定的不同，所以不同的组织所需要的烤片时间、染色时间理论上也是不同的，并且，因为HE染色是一种多步骤、多因素决定的实验方法，无论是手工还是机器操作，都存在着许多影响因素，甚至会出现不理想的染色结果,从而导致误判和误诊[7]。在日常工作中，我们不可能对每一组织单独染色，只能找出一个相对适合的染色程序，本实验显示，用70℃烤片30min，苏木素染色4min，伊红染色3min比较合适于大部分组织的染色，可作为病理实验室质量控制的标准程序进行批量染色。此外，现在国内病理科用得比较多的Harrys苏木素是退行性染色，需要用0.5%盐酸酒精分化，而分化是比较难控制的一个步骤，不利于进行质量控制，我们推荐使用Mayer苏木素进行核的染色，因为Mayer苏木素是进行性染色，不需要分化，有利于设定标准化染色程序而进行质量控制。

[1]马恒辉,周晓军,陈国璋.浅淡组织病理学实验室的标准化[J].诊断病理学杂志,2002,6:374.

[2]刘 勇,戴艳枝,袁 晟.采用组织芯片技术检测乳腺癌中泛素、S期激酶相关蛋白2、细胞周期调控因子p27的表达[J].中华外科杂志,2004,5:309-310.