毛征宇，万本愿，王文丁，陈 会，徐红萍

(1、江西省人民医院输血科，江西 南昌 330006；2、江西省临床检验中心，江西 南昌 330006；3、江西省人民医院检验科，江西 南昌 330006)

准确鉴定血型是保证临床输血安全、防止重大医疗事故发生的重要保证。常规应用的ABO血型血清学正反定型技术，具有简单实用的特点，但亦存在一定的局限性，而基因分型的方法在某种程度上克服了血清学实验的弱点，可以作为血清学方法的有益补充。本研究采用血清学和PCRSSP法两种方法对比鉴定ABO血型，旨在江西地区临床输血工作中，建立起稳定的PCR-SSP基因分型方法。

1 材料与方法

1.1 标本来源 2006年10月至2011年10月，随机选取江西地区健康汉族无关个体100例，年龄18～55岁。抽取静脉血3ml并EDTA抗凝。

1.2 试剂抗A、抗B血型定型试剂(北京金豪制药股份有限公司)，AC、BC、OC及正反定型微柱凝胶卡(长春博讯生物技术有限责任公司)，ABO基因分型试剂盒(美国G&T公司)，基因组DNA提取试剂盒、Taq酶和 Marker(TaKaRa公司)。

1.3 方法

1.3.1 DNA提取 DNA提取严格按TaKaRa公司试剂盒说明书的要求进行操作。抽提完成后，取10μl DNA溶液进行琼脂糖凝胶电泳，于紫外灯下观察结果，并使用紫外分光光度计测定其OD值然后计算浓度(UV752N型紫外分光光度计，上海佑科仪器仪表有限公司)，DNA终浓度调节至40～70ng/μl。

1.3.2 PCR扩增 PCR反应体系的总体积为9μl，包含1μl DNA样品，1μl Taq酶 (预先经 15倍稀释，0.33-0.5U)，基本引物 Mix-A、Mix-A201、Mix-B和Mix-O的混合液7μl。PCR扩增条件(1000-Series Thermal Cyclers型PCR仪，美国Bio-rad公司)：预变性 95℃ 5min→变性 95℃ 30s→退火 60℃30s→延伸72℃ 90s(30个循环)→终末延伸72℃5min→保温4℃。

1.3.3 PCR产物的电泳分析 PCR产物用2.5%琼脂糖凝胶电泳分析，以100V电压电泳25min后紫外灯下观察条带，扩增条带与内对照207bp(人生长激素基因，hGH)及DL 500 DNA Marker相比较并读取结果，凝胶成像系统中拍照记录(Uvipro型凝胶成像分析系统，美国Bio-Rad公司)。……