朱良全，李聪研，蒋玉文，田冬青，孙 晔

(1.中国兽医药品监察所，北京 100081;2.北京中海生物科技公司，北京 100081)

产气荚膜梭菌(Clostridium perfringens)，又称魏氏梭菌(Clostridium welchii)，依据其主要致死性毒素与其抗毒素中和试验，可将此菌分为A、B、C、D和E 5个型。其中A型菌能导致人类气性坏疽和食物中毒，也是多种动物疾病的病原菌，如兔、禽及仔猪的坏死性肠炎和肠毒血症［1］。其致病因子主要是α毒素，免疫的关键在于抗毒素［2-4］。

目前，我国A型产气荚膜梭菌病灭活疫苗生产采用的是传统培养基，如厌气肉肝汤和肉肝胃酶(膜)消化汤［5］。该培养基培养厌氧菌效果好，毒力强，但在实际生产中存在以下问题:(1)成分复杂，难以标准化。其主要成分牛肉和肝等，受动物品种、年龄、新鲜程度影响大，造成培养基批次间质量不稳定。(2)广谱性高，专一性弱。该培养基适用于多数厌氧菌的培养，有效产毒因子不足。(3)制作繁琐，需经验因素。牛肉及肝处理、煮沸及滤过，胃酶(膜)的活力及消化程度判断，需要较高的经验值。针对上述缺点，本课题组研制成功A型产气荚膜梭菌合成培养基。为进一步明确A型产气荚膜梭菌合成培养基使用参数，对合成培养基的培养条件、菌株的适用范围及培养毒素的浓缩工艺进行了优化，为我国A型产气荚膜梭菌灭活疫苗大规模生产工艺改进提供参考。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 菌株 A型产气荚膜梭菌CVCC37株(原C57-1株)、CVCC52株、CVCC2027株、CVCC2030株、CVCC2014株，由中国兽医药品监察所菌种保藏室鉴定、保管和供应。

1.1.2 培养基及溶液 厌气肉肝汤，批号为20091223;肉肝胃酶(膜)消化汤，批号分别为20100105、20100112、20100119;明胶缓冲液(稀释毒素用)，批号为20100201。……