李旺林， 曹 杰， 张伟健， 杨 平， 钟俊斌， 杨建荣， 张 通

(广州医学院附属广州市第一人民医院胃肠外科，广东广州510180)

有研究报道，巴西钩虫(Nippostrongylus brasiliensis)感染导致肠道E－cadherin的表达改变，导致小肠上皮细胞的附着力损失［1］;而多形螺旋线虫(Heligmosomoides polygyrus)感染导致小肠上皮通透性增加［2］。但肠道蠕虫感染及其诱导的Th2反应对结肠上皮通透性影响的相关研究较少见。目前还不清楚蠕虫感染是否可引起结肠上皮通透性改变和如何影响结肠上皮通透性。本文旨在观察旋毛虫对肠道黏膜通透性影响，并初步探讨其机制。

材料和方法

1 动物及分组

选择6到8周大的雌性BALB/c小鼠(SPF级)，以高压蒸汽消毒的食物和水喂养。将BALB/c鼠随机分为2组，即T．spiralis感染组(BALB/c+T．s组)和无T．spiralis感染组(对照组，BALB/c组)。每只小鼠经口服喂养T．spiralis幼虫400条(幼虫配成悬液喂养，并以显微镜鉴定为活虫)。

2 结肠通透性的分析

小鼠感染T．spiralis7 d后，直肠内给予辣根过氧化物酶(horseradish peroxidase，HRP;Sigma)，然后测量血液中HRP浓度判定结肠通透性。在小鼠禁食12 h之后，以2%戊巴比妥钠麻醉(50 mg/kg)，50μL辣根过氧化物酶(含0．6 mg)以针头经直肠注入。辣根过氧化物酶灌注后的0(即为未灌注HRP的时点)、60和120 min后，从尾静脉收集血液样本，采用ELISA法测定血清辣根过氧化物酶浓度。

3 血清IgG1和IgG2a的检测

将上述尾静脉收集的血液样本，以ELISA法检测IgG1和IgG2a的表达量。

4 淋巴细胞细胞因子ELISA检测

T．spiralis感染7 d后，处死小鼠。所有小鼠经断颈法处死。打开腹腔，取出肠系膜淋巴结(mesenteric lymph node，MLN)。将外周淋巴结分组研磨(溶液为cDMEM)，用70μm的滤器过滤，4℃、1 500 r/min离心8 min，弃除上清，加入2 mL cDMEM溶液，将细胞振荡溶解，将之调成5×109/L。……