丁 勇， 程欢欢， 余榕捷， 陈建苏

(暨南大学1附属第一医院眼科，2 生物工程研究所，3 医学院眼科研究室，广东 广州510632)

垂体腺苷酸环化酶激活多肽(pituitary adenylate cyclase－activating polypeptide，PACAP)是具有多种重要生物学功能的神经肽，广泛分布在神经系统中，主要通过作用于其特异性受体PACAP 1 型受体(PACAP type 1 receptor，PAC1－R)来实现神经保护及修复的功能，这一作用已在视网膜上得到证实［1］。但PACAP 易被二基肽酶水解生成自身拮抗剂PACAP (6－27)或(6－38)［2］。PACAP 的N 端(His1－Ser2－Asp3－Gly4)是激活PAC1－R 的关键结构域［3］。而小环肽C*HSDGIC*(CHC)由PACAP N 端5 个氨基酸经二硫键环合而成，稳定性较PACAP 更强，是PAC1－R 的新型高效激动剂［4］。

在老年性黄斑变性(age－related macular degeneration，AMD)等慢性视网膜疾病中，视网膜色素上皮(retinal pigment epithelium，RPE)的损伤主要表现为细胞凋亡［5］。内源性色素水平增高和后极部眼底代谢活动增强使得黄斑易受光诱导的氧化应激损伤［6］。Youn 等［7］发现紫外线(ultraviolet，UV)照射能引起活性氧生成进而导致氧化性应激，诱导人RPE 细胞系ARPE－19 凋亡。而Mester 等［8］研究发现PACAP 对氧化应激诱导的ARPE－19 凋亡具有抑制作用。本实验旨在研究CHC 对中波紫外线(ultraviolet B，UVB)诱导的人RPE 细胞凋亡的影响，为RPE 相关病变的治疗提供理论依据。

材 料 和 方 法

1 主要材料与试剂

CHC(暨南大学生物工程研究所余榕捷教授惠赠);兔源性多克隆PAC1－R 抗体(Santa Cruz);兔单克隆β－actin 抗体(Cell Signaling);山羊抗兔IgG 抗体(Santa Cruz);CCK－8 试剂盒(Donjindo);流式细胞仪(BD FACSAria TM);全波长多功能酶标仪(Tecan Safire2，Switzerland)。

2 方法

2.1 人RPE 细胞培养 RPE 细胞来源于本实验室存储，第2 ～7 代用于实验，用含10% FBS、1×105U/L 青霉素和100 mg/L 链霉素的DMEM 高糖培养基培养细胞，置于37 ℃、5% CO2培养箱内，3 ～5 d 传代。

2.2 CCK－8 法检测 人RPE 细胞按5 ×103cells/well 密度于96 孔板铺板，长至60%融合的细胞单层后加入不同浓度CHC，继续孵育24 h。……