刘 平

（丹东市食品药品检验所，辽宁 丹东 118002）

诺西肽（Nosihepide）是由活跃链霉菌（Streptomyces actuosu）产生的一种含硫多肽类抗生素，分子式为C15H43N13O12S6，属硫链丝菌素（thiostrepton）类[1]。它在体内能有效抑制革兰氏阳性细菌的活性[2]。诺西肽目前主要作为饲料添加剂，优点是不被畜禽吸收、在体内无残留，微量加入饲料中就可以提高禽畜的出肉率[2]，并可加入鱼饵中以防止鱼类的坏死性肠炎及加快其生长。国外于20世纪80年代末批准上市，目前日本和法国已将其列为法定饲料添加剂。

1 实验材料

1.1 菌种

出发菌：诺西肽产生菌S.actuosus（由沈阳药大实验室提供）；鉴定菌：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）

1.2 药品

亚硝基胍；95%乙醇；糊精；酵母粉；NaCl；CaCO3等

1.3 仪器

摇床（250r/min）；高压灭菌锅；超净工作台；电子天平；恒温水浴；紫外灯箱（紫外灯15W，照射距离40cm）；离心机。

1.4 试剂

1.4.1 亚硝基胍溶液（NTG）

电子天平精确称取NTG于无菌试管中，加入微量N，N—二甲基甲酰胺（DMF）溶解，用适量磷酸盐缓冲液稀释至所需浓度（现用现配）。

1.4.2 展开剂

氯仿：甲醇：醋酸 = 86：12：2（体积比）

2 实验方法

2.1 紫外线诱变

取2ml单孢子悬液于培养皿中，置于紫外灯箱中，在轻微震荡下照射不同时间，立即避光培养1h，经稀释后涂布培养。

2.2 NTG诱变

取单孢子悬液于无菌试管中，加入NTG溶液28℃或40℃水浴，经稀释后涂布培养。

2.3 效价测定

取发酵液以1∶1（V/V）比例加入95%乙醇，37℃浸泡半小时，离心取上清液用生物效价法测定。

图1 死亡率曲线

图2 正变率曲线

图3 死亡率曲线

图4 正变率曲线

3 结果与讨论

3.1 出发菌株的筛选及稳定性考察

对原始菌株S.actuosus进行自然分离，选择在连续传代下仍有较好产抗能力的S-19作为诱变出发菌株。……